海洋浮游生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)2008

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1、海洋浮游生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和顯微鏡的鏡檢方法……………………………………………1實(shí)驗(yàn)一藻類細(xì)胞的觀察與計(jì)數(shù)………………………………………………2實(shí)驗(yàn)二藻類細(xì)胞大小的測(cè)定…………………………………………………4實(shí)驗(yàn)三微藻的分離培養(yǎng)………………………………………………………6實(shí)驗(yàn)四浮游動(dòng)物的觀察1……………………………………………………12實(shí)驗(yàn)五浮游動(dòng)物的觀察2……………………………………………………13實(shí)驗(yàn)六浮游動(dòng)物的觀察3……………………………………………………16附錄水生生物的基本調(diào)查方法……………………………………………17實(shí)驗(yàn)室規(guī)則????1．實(shí)驗(yàn)課前必須預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，實(shí)驗(yàn)課不得無(wú)

2、故遲到、早退、曠課。???2．實(shí)驗(yàn)時(shí)做到細(xì)致，認(rèn)真，避免吸煙，隨地吐痰，大聲喧嘩。???3．愛(ài)護(hù)公物，不隨便動(dòng)用實(shí)驗(yàn)室的儀器，標(biāo)本。若損壞器材，立即向老師登記，若要借用實(shí)驗(yàn)器材，須征得老師同意。4．每次實(shí)驗(yàn)后，須交實(shí)驗(yàn)報(bào)告，將所用器材擦洗干凈，放回原處，值日生要負(fù)責(zé)清潔工作。?顯微鏡的鏡檢方法????顯微鏡的使用在基礎(chǔ)課已經(jīng)熟悉，不必贅述，觀察浮游生物標(biāo)本，鏡檢方法如下：???1．制片???（1）在制片前先將蓋玻片、載玻片擦干凈，用吸管吸取器皿中的標(biāo)本液，滴一滴于載玻片上，然后用鑷子將蓋破片沿著水珠的邊緣慢慢放下，若發(fā)現(xiàn)標(biāo)本液溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本液吸回到器皿中，擦凈載玻片和蓋玻片，

3、重新制片，直至水滴恰好在蓋玻片內(nèi)，并無(wú)氣泡出現(xiàn)為止。26???觀察絲狀藻類時(shí)，先用鑷子取3-5根藻絲放置于載玻片上，用解剖針將藻撥弄均勻，然后吸一滴水，蓋上蓋玻片即可觀察。???（2）每次使用顯微鏡之前，首先檢查鏡子的各機(jī)械部分和鏡頭是否有毛病，如發(fā)現(xiàn)有毛病立即向老師報(bào)告，及時(shí)進(jìn)行處理。???（3）在使用顯微鏡之前、之后必須按顯微鏡的保養(yǎng)方法把它擦干凈。???2．鏡檢步驟將做好的片子置于載物臺(tái)上，用物鏡的低倍、中倍、高倍依次檢查。注意：在用高倍鏡頭觀察時(shí)，只需用微調(diào)旋鈕，以免鏡頭壓壞蓋玻片而粘水，引起鏡頭發(fā)霉以至影響使用效果和壽命。實(shí)驗(yàn)一?藻類細(xì)胞的觀察與計(jì)數(shù)?（一）實(shí)驗(yàn)的目的和要求??顯微鏡

4、下觀察并識(shí)別幾種常見(jiàn)海洋微藻的主要形態(tài)特征，識(shí)別常見(jiàn)種類。了解血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理，掌握血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)方法。（二）原理利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接進(jìn)行測(cè)定。它觀察在一定的容積中的藻類細(xì)胞的個(gè)體數(shù)目，然后推算出藻類細(xì)胞密度。計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚玻璃片，玻片上有四個(gè)槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)，中央平臺(tái)又由一短槽隔成兩半，其上各刻有一小方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大格，中央的一大格作為計(jì)數(shù)用，稱為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室刻度有2種：一種是25中格X16小格，而另一種為16中格X25小格，它們都是由400個(gè)小格組成。每個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1mm，則每個(gè)大方格面積為1X1=1mm2。蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間高度為0.1mm

5、,所以每個(gè)計(jì)數(shù)室的體積為0.1X1X1=0.1mm3,每個(gè)大格有400個(gè)小格，所以每個(gè)小方格體積為0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。???（三）實(shí)驗(yàn)器材及藥品???顯微鏡、載玻片、蓋玻片、解剖盤、解剖針、小鑷子、吸管、培養(yǎng)皿、紗布、擦鏡紙、魯格氏液、自備實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙及繪圖鉛筆（H、2H），橡皮等。???（四）方法與步驟261、用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定藻細(xì)胞的數(shù)量2、檢查血球計(jì)數(shù)板取血球計(jì)數(shù)板一塊，先用顯微鏡檢查計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室，看其是否沾有雜質(zhì)或干涸著的細(xì)胞，若有污物則通過(guò)擦洗、沖洗，使其清潔。鏡檢清洗后的計(jì)數(shù)板，直至計(jì)數(shù)室無(wú)污物時(shí)才可使用。3、稀釋樣品將培養(yǎng)后的藻培養(yǎng)液振蕩振

6、搖混勻，然后作一定倍數(shù)的稀釋。稀釋度選擇以小方格中的分布的細(xì)胞清晰可數(shù)為宜。一般以每小格內(nèi)含4～5個(gè)細(xì)胞的稀釋度為宜。4、加樣取出一塊干凈蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板中央。用滴管取1滴藻培養(yǎng)液稀釋懸液注入蓋玻片邊緣，讓藻液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不能有氣泡，若藻液太多可用吸水紙吸去。靜置5—10分鐘。對(duì)于具鞭毛運(yùn)動(dòng)迅速種類，應(yīng)先用魯格試液固定，搖勻再取樣。5、鏡檢待細(xì)胞不動(dòng)后進(jìn)行鏡檢計(jì)數(shù)。先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室方格后，再用高倍鏡測(cè)數(shù)。一般應(yīng)取上下及中央五個(gè)中格的總藻數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)若遇到位于線上的菌體，一般只計(jì)數(shù)格上方（下方）及右方（左方）線上的細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)不時(shí)調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的細(xì)胞。每個(gè)樣品重復(fù)3次。6

7、、計(jì)算取以上計(jì)數(shù)的平均值，按下列公式計(jì)算出每毫升藻液中的含藻量。樣品中細(xì)胞數(shù)/ml=每中格平均細(xì)胞數(shù)x25x10000x稀釋倍數(shù)（采用25x16規(guī)格）。7清洗計(jì)數(shù)板用畢后先用95%的形酒精輕輕擦洗，再用蒸餾水淋洗，然后吸干，最后用擦鏡紙揩干凈。若計(jì)數(shù)的樣品是病原微生物，則須先浸泡在5%石炭酸溶被中進(jìn)行消毒，然后再行清洗。清洗后放回原位，切勿用硬物洗刷。8、思考1、能否用血球計(jì)數(shù)板在油鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)？