濕地松叢生芽增殖的研究

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1、第!"卷第#期西南林學(xué)院學(xué)報(bào)$%&’!"(%’#!))"年*月+,-.(/0,12,-3456231,.623.78,006962:;’!))"濕地松叢生芽增殖的研究!何月秋，葉建仁""，池樹友（南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院，江蘇南京!&))#<）摘要：以濕地松無菌苗頂芽為外植體，誘導(dǎo)濕地松叢生芽的形成，誘導(dǎo)率可達(dá)&))=’研究激素水平、基本培養(yǎng)基、繼代周期、蔗糖濃度對(duì)濕地松叢生芽增殖的影響，結(jié)果表明：當(dāng)>?@/為&ABC0，(//為)’)#ABC0時(shí)，最高增殖率可達(dá)D"’<&=，最高增值倍數(shù)為EF&&；在"種基本培養(yǎng)基G8.，5HI，&C!I2

2、，&C!9G，H>中，G8.比較適合叢生芽的增殖和生長(zhǎng)；當(dāng)培養(yǎng)基中蔗糖濃度為E=時(shí)，能夠形成健壯的叢生芽；每隔!)天繼代&次，既能保持外植體的幼嫩狀態(tài)，也能提高叢生芽的生長(zhǎng)速度’關(guān)鍵詞：濕地松；組織培養(yǎng)；叢生芽；增殖中圖分類號(hào)：2<*&F!E>F)"文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：/文章編號(hào)：&))#?<&<*（!))"）)#?))&E?)E濕地松是一種優(yōu)良的造林樹種，其生長(zhǎng)迅速，中冷藏E周后，取出用洗潔精清洗干凈，)’&=高錳干形通直，松脂含量高，對(duì)松材線蟲和松毛蟲具有酸鉀溶液浸泡&!K，流水沖洗&K，在超凈工作臺(tái)較強(qiáng)的抵抗性，在我國(guó)南方廣為引種栽植’然而，上剝除種

3、殼，<)=酒精浸泡#)L，無菌水沖洗#次，由于松針褐斑?。?"#$%&’()#($$#)#&*$）的嚴(yán)重危然后用)’&=的氯化汞溶液浸泡#AMN，無菌水沖害，其進(jìn)一步的發(fā)展受到了很大的限制［&］’目前，洗EO"次’移入HG/培養(yǎng)基中培養(yǎng)成無菌苗，備所建立的濕地松抗病種子園已經(jīng)進(jìn)入結(jié)實(shí)階段’用F組織培養(yǎng)方法能夠快速、高效繁殖優(yōu)良材料以滿!"#叢生芽的誘導(dǎo)足生產(chǎn)的需求，緩解抗性種子供不應(yīng)求的矛盾’切取培養(yǎng)!)O!"P的濕地松無菌苗帶子葉頂南京林業(yè)大學(xué)自&**D年開展?jié)竦厮煽顾舍樅职撸?］芽進(jìn)行叢生芽的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基在朱麗華的病無性系的組織培養(yǎng)研究工作

4、以來，以子葉為外基礎(chǔ)上稍加改進(jìn)’植體誘導(dǎo)濕地松的愈傷組織，并建立其懸浮培養(yǎng)!"$叢生芽的增殖體系［!，#］’隨著研究工作的進(jìn)一步開展，目前以濕在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上接種的外植體，待叢生芽長(zhǎng)地松成熟胚、離體胚無菌苗、無菌實(shí)生苗等為外植至!QA左右，切取單芽置于添加有不同濃度的>體，成功地建立其器官發(fā)生的組織培養(yǎng)再生體系，［E，"］?@/和(//的G8.培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖實(shí)驗(yàn)’并且獲得的試管苗移栽成活’盡管濕地松叢生篩選出比較適合的激素水平（>?@/&ABC0，(//芽的誘導(dǎo)率很高（*"=以上），其叢生芽的生根率也在>)=以上，試管苗移栽成活率達(dá)到D)=，但叢)

5、’)#ABC0）后，在此基礎(chǔ)上同步進(jìn)行叢生芽增殖生芽的增殖比較困難，增殖系數(shù)不高，并且隨著增的基本培養(yǎng)基的篩選，繼代周期、繼代次數(shù)的篩殖代數(shù)的增加，叢生芽出現(xiàn)生長(zhǎng)勢(shì)衰弱、老化、死選，蔗糖濃度的篩選’亡等現(xiàn)象’因此，為實(shí)現(xiàn)濕地松抗病家系的試管!"%培養(yǎng)條件苗工廠化生產(chǎn)，系統(tǒng)研究叢生芽的增殖非常必要’以上培養(yǎng)基在誘導(dǎo)叢生芽時(shí)，添加#)BC0蔗糖，而在叢生芽增殖時(shí)則添加E)BC0蔗糖；卡拉膠!材料與方法<’)BC0，;4"’D；&!&J高溫高壓滅菌&"AMN’整!"!外植體的培養(yǎng)個(gè)培養(yǎng)過程均在光照培養(yǎng)室中完成，溫度!"R精選優(yōu)良的抗性濕地松種子放置在EJ

6、冰箱!J，每日光照&EK，光照強(qiáng)度!)))ST’!收稿日期：!))"?)>?)*""為通訊作者基金項(xiàng)目：江蘇省高等學(xué)校研究生創(chuàng)新計(jì)劃F萬方數(shù)據(jù)作者簡(jiǎn)介：何月秋（&*<"?），女，四川大邑人，博士生，主要從事抗病育種方面的學(xué)習(xí)與研究’第-期何月秋等：濕地松叢生芽增殖的研究’.!"#計(jì)算方式表’3,,不同濃度對(duì)濕地松叢生芽誘導(dǎo)的影響!個(gè)月后統(tǒng)計(jì)芽的誘導(dǎo)率和增殖倍數(shù)")*+,3,,外植體分化數(shù)誘導(dǎo)率叢生芽生長(zhǎng)勢(shì)*’）*’）%個(gè)%個(gè)%#（%/0·1（%/0·1誘導(dǎo)率（#）$分化芽數(shù)（個(gè)）%接種芽數(shù)（個(gè)）-".("(!-(-(’((芽點(diǎn)很小，生長(zhǎng)緩慢&’((

7、#-".("(--(-(’((芽點(diǎn)較小，生長(zhǎng)緩慢增值倍數(shù)$有效芽數(shù)（個(gè)）%接種芽數(shù)（個(gè)）-".("(4-(-(’((芽點(diǎn)大，生長(zhǎng)迅速-".("(.-(-(’((芽點(diǎn)較大，生長(zhǎng)迅速$結(jié)果與分析$"$濕地松叢生芽的增殖$"!濕地松叢生芽的誘導(dǎo)相關(guān)資料顯示，多數(shù)研究者能夠建立濕地松本試驗(yàn)結(jié)果表明，盡管單獨(dú)使用細(xì)胞分裂素)組織培養(yǎng)的再生體系，以獲得其再生植株"而對(duì)*+,就能誘導(dǎo)濕地松叢生芽的分化（以-"./0%1誘導(dǎo)成芽叢后的中間繁殖體如何大量快速繁殖研為宜，誘導(dǎo)率達(dá))2"!(#），但分化后的叢生芽生長(zhǎng)究較少"本試驗(yàn)探討影響濕地松叢生芽增殖的不比較緩慢，且

8、老化嚴(yán)重"由表’可知，當(dāng)培養(yǎng)基中同激素濃度及激素組合，并已經(jīng)能夠誘導(dǎo)出生長(zhǎng)添加適量的3,,時(shí)，無菌苗頂芽的叢生芽誘導(dǎo)率正常