人凝血酶tm酶聯(lián)免疫檢測

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1、人凝血酶(TM)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測人凝血酶(TM)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。用途：用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中凝血酶(TM)測定。工作原理本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人凝血酶(TM)水平。向預(yù)先包被了人凝血酶(TM)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入人凝血酶(TM)，溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗TM抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)

2、色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人凝血酶(TM)的濃度呈正相關(guān)。試劑盒組成試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品1600U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存鏈霉親和素-HRP3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存生物素標(biāo)記的抗TM抗體0.5ml×1瓶1ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保

3、存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存需要而未提供的試劑和器材9AMEKOTEL:+86-021-55785280557585281FAX:+86-021-55785279E-mail:biolzy@yahoo.cn1．37℃恒溫箱。2．標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。3．精密移液器及一次性吸頭4．蒸餾水，5．一次性試管6．吸水紙注意事項(xiàng)1．從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．各步加樣均應(yīng)使用加

4、樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差3．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).4．為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。5．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。6．底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中標(biāo)本要求9AMEKOTEL:+86-0

5、21-55785280557585281FAX:+86-021-55785279E-mail:biolzy@yahoo.cn1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。操作程序1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)800U/L5號標(biāo)準(zhǔn)品120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400U/L4號標(biāo)準(zhǔn)品120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品

6、加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200U/L3號標(biāo)準(zhǔn)品120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100U/L2號標(biāo)準(zhǔn)品120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50U/L1號標(biāo)準(zhǔn)品120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3.加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗TM抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素

7、-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；3）代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗TM抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。8.測定：以空白空調(diào)零，450nm

8、波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。9AMEKOTEL:+86-021-55785280557585281FAX:+86-021-55785279E-mai