fas誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與糖尿病心肌病變的研究論文

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1、Fas誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與糖尿病心肌病變的研究論文【摘要】目的：探討Fas誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡對糖尿病心肌病變的影響，為進(jìn)一步研究糖尿病發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：按體重將動物隨機(jī)分為正常對照組(10只)和實(shí)驗(yàn)組(20只),各組大鼠禁食12h后,實(shí)驗(yàn)組大鼠以60mg/kg的劑量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/L、pH=4.4的構(gòu)櫞酸鹽緩沖液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液),正常對照組大鼠(NC)注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液。觀察動物飲水、進(jìn)食及尿量變化等情況。1周后,采尾血測血糖,以血糖濃度16.6mmol/L,飲水量40ml/

2、d,尿糖強(qiáng)陽性(+++～++++)的大鼠作為糖尿病大鼠。6周后將各組大鼠處死,切取心室肌組織,進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察。利用HPIAS2000圖像分析系統(tǒng)測定Fas在以上兩組中表達(dá)的平均光密度和平均陽性面積率。結(jié)果：糖尿病對照組心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)可見極少量棕黃色顆粒，F(xiàn)as表達(dá)弱；實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)可見較多棕黃色顆粒，F(xiàn)as呈強(qiáng)陽性表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示對照組與實(shí)驗(yàn)組之間Fas的平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義(P0.05)。結(jié)論：糖尿病心肌病變過程中存在心肌細(xì)胞凋亡,心肌細(xì)胞凋亡可能是導(dǎo)致糖尿病心臟功能障礙的重要原因之一。

3、【關(guān)鍵詞】糖尿病;心肌;Fas;大鼠糖尿病是威脅人類健康的重大疾病之一，并呈持續(xù)增長，對人們的身體健康造成極大威脅。我國2型糖尿病發(fā)病率的上升速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于世界水平，預(yù)計(jì)2010年我國2型糖尿病發(fā)病率將達(dá)到12%。大量臨床資料和流行病調(diào)查均顯示心血管疾病是糖尿病患者死亡的主要原因。糖尿病心肌病的概念于1974年Hamby［1］等首次提出，經(jīng)過多年研究之后.freelornecrosisfactorreceptor,TNFR）和神經(jīng)生長因子受體（nervegroyeline,SM）途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡信號的傳導(dǎo)，即Fas被激活后，胞內(nèi)鞘磷脂

4、酶活化，水解SM產(chǎn)生神經(jīng)酰胺（ceramide,CM），CM作為第二信使，傳遞凋亡信號［3］。目前關(guān)于糖尿病心肌病變過程中心肌細(xì)胞凋亡作用的研究報(bào)道甚少。本實(shí)驗(yàn)以鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,觀察糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡,從而揭示心肌細(xì)胞凋亡在糖尿病心肌病變發(fā)生發(fā)展中的作用。1材料與方法11材料111實(shí)驗(yàn)動物昆明種SD大鼠30只,雄性,體重180～200g,武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供,適應(yīng)飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。12方法121動物模型建立及分組按體重隨機(jī)分為正常對照組(10只)和實(shí)驗(yàn)組(20只),各組大鼠禁食12

5、h后,實(shí)驗(yàn)組大鼠以60mg/kg的劑量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/L、pH=4.4的構(gòu)櫞酸鹽緩沖液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液),正常對照組大鼠(NC)注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液。觀察動物飲水、進(jìn)食及尿量變化等情況。注射后第2、7d采尾血測血糖,以后每2周測一次血糖、尿糖,將血糖濃度16.7mmol/L,飲水量40ml/d,尿糖強(qiáng)陽性(+++～++++)的大鼠定為糖尿病模型。6周后將各組大鼠處死,切取心室肌組織,進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察。122主要試劑濃縮型鼠抗人Fas單克隆抗體（美國SantaCruz

6、公司）；超敏即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒（福州邁新生物有限公司）；顯色試盒及多聚賴氨酸（北京中山生物技術(shù)有限公司）。123主要儀器Y）途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡信號的傳導(dǎo)，即Fas被激活后，胞內(nèi)鞘磷脂酶活化，水解SM產(chǎn)生神經(jīng)酰胺（ceramide,CM），CM作為第二信使，傳遞凋亡信號［13］。已有的研究表明，Caspases3是Fas介導(dǎo)細(xì)胞凋亡蛋白酶級聯(lián)反應(yīng)中的“核心”蛋白酶，抑制Caspases3酶活性或拮抗Caspases3功能可使Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡受抑，說明Caspases3對Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是必需的［14

7、］。在過去的研究中我們已報(bào)道過Caspase3在對照組心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)弱，糖尿病組心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)Caspase3呈強(qiáng)陽性表達(dá)。本課題研究結(jié)果顯示：Fas在糖尿病組的表達(dá)高于對照組，差異有顯著性（P＜0.01)，這說明Fas是通過Caspase級聯(lián)這一途徑激活Caspase3而誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡的。Cai等［15］報(bào)道在糖尿病患者和動物模型中都可觀察到心肌細(xì)胞死亡,通過抗氧化劑或凋亡信號途徑的特異性抑制劑抑制心肌細(xì)胞死亡,可以明顯的阻止糖尿病的心臟毒性,因此心肌細(xì)胞死亡在糖尿病性心肌病變中有重要作用。高血糖可直接導(dǎo)致活體心肌細(xì)胞

8、凋亡,高血糖導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡至少部分是通過細(xì)胞色素C激活的caspase3途徑的激活而控制。目前,細(xì)胞凋亡研究日益受到重視。從某種程度上說,細(xì)胞凋亡與細(xì)胞的生長和分化同樣重要,是細(xì)胞生命的基本特征之一。細(xì)胞凋亡是一個(gè)非常復(fù)雜的生理