fas誘導細胞凋亡與糖尿病心肌病變的研究論文

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1、Fas誘導細胞凋亡與糖尿病心肌病變的研究論文【摘要】目的：探討Fas誘導細胞凋亡對糖尿病心肌病變的影響，為進一步研究糖尿病發(fā)病機制提供實驗依據(jù)。方法：按體重將動物隨機分為正常對照組(10只)和實驗組(20只),各組大鼠禁食12h后,實驗組大鼠以60mg/kg的劑量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/L、pH=4.4的構櫞酸鹽緩沖液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液),正常對照組大鼠(NC)注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液。觀察動物飲水、進食及尿量變化等情況。1周后,采尾血測血糖,以血糖濃度16.6mmol/L,飲水量40ml/

2、d,尿糖強陽性(+++～++++)的大鼠作為糖尿病大鼠。6周后將各組大鼠處死,切取心室肌組織,進行免疫組織化學實驗觀察。利用HPIAS2000圖像分析系統(tǒng)測定Fas在以上兩組中表達的平均光密度和平均陽性面積率。結果：糖尿病對照組心肌細胞胞漿內可見極少量棕黃色顆粒，F(xiàn)as表達弱；實驗組心肌細胞胞漿內可見較多棕黃色顆粒，F(xiàn)as呈強陽性表達。圖像分析結果顯示對照組與實驗組之間Fas的平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義(P0.05)。結論：糖尿病心肌病變過程中存在心肌細胞凋亡,心肌細胞凋亡可能是導致糖尿病心臟功能障礙的重要原因之一。

3、【關鍵詞】糖尿病;心肌;Fas;大鼠糖尿病是威脅人類健康的重大疾病之一，并呈持續(xù)增長，對人們的身體健康造成極大威脅。我國2型糖尿病發(fā)病率的上升速度遠遠快于世界水平，預計2010年我國2型糖尿病發(fā)病率將達到12%。大量臨床資料和流行病調查均顯示心血管疾病是糖尿病患者死亡的主要原因。糖尿病心肌病的概念于1974年Hamby［1］等首次提出，經過多年研究之后.freelornecrosisfactorreceptor,TNFR）和神經生長因子受體（nervegroyeline,SM）途徑介導細胞凋亡信號的傳導，即Fas被激活后，胞內鞘磷脂

4、酶活化，水解SM產生神經酰胺（ceramide,CM），CM作為第二信使，傳遞凋亡信號［3］。目前關于糖尿病心肌病變過程中心肌細胞凋亡作用的研究報道甚少。本實驗以鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,觀察糖尿病大鼠心肌細胞凋亡,從而揭示心肌細胞凋亡在糖尿病心肌病變發(fā)生發(fā)展中的作用。1材料與方法11材料111實驗動物昆明種SD大鼠30只,雄性,體重180～200g,武漢大學醫(yī)學院實驗動物中心提供,適應飼養(yǎng)1周后進行實驗。12方法121動物模型建立及分組按體重隨機分為正常對照組(10只)和實驗組(20只),各組大鼠禁食12

5、h后,實驗組大鼠以60mg/kg的劑量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/L、pH=4.4的構櫞酸鹽緩沖液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液),正常對照組大鼠(NC)注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液。觀察動物飲水、進食及尿量變化等情況。注射后第2、7d采尾血測血糖,以后每2周測一次血糖、尿糖,將血糖濃度16.7mmol/L,飲水量40ml/d,尿糖強陽性(+++～++++)的大鼠定為糖尿病模型。6周后將各組大鼠處死,切取心室肌組織,進行免疫組織化學實驗觀察。122主要試劑濃縮型鼠抗人Fas單克隆抗體（美國SantaCruz

6、公司）；超敏即用型SP通用型免疫組織化學試劑盒（福州邁新生物有限公司）；顯色試盒及多聚賴氨酸（北京中山生物技術有限公司）。123主要儀器Y）途徑介導細胞凋亡信號的傳導，即Fas被激活后，胞內鞘磷脂酶活化，水解SM產生神經酰胺（ceramide,CM），CM作為第二信使，傳遞凋亡信號［13］。已有的研究表明，Caspases3是Fas介導細胞凋亡蛋白酶級聯(lián)反應中的“核心”蛋白酶，抑制Caspases3酶活性或拮抗Caspases3功能可使Fas介導的細胞凋亡受抑，說明Caspases3對Fas介導的細胞凋亡是必需的［14

7、］。在過去的研究中我們已報道過Caspase3在對照組心肌細胞胞漿內表達弱，糖尿病組心肌細胞胞漿內Caspase3呈強陽性表達。本課題研究結果顯示：Fas在糖尿病組的表達高于對照組，差異有顯著性（P＜0.01)，這說明Fas是通過Caspase級聯(lián)這一途徑激活Caspase3而誘發(fā)心肌細胞凋亡的。Cai等［15］報道在糖尿病患者和動物模型中都可觀察到心肌細胞死亡,通過抗氧化劑或凋亡信號途徑的特異性抑制劑抑制心肌細胞死亡,可以明顯的阻止糖尿病的心臟毒性,因此心肌細胞死亡在糖尿病性心肌病變中有重要作用。高血糖可直接導致活體心肌細胞

8、凋亡,高血糖導致的心肌細胞凋亡至少部分是通過細胞色素C激活的caspase3途徑的激活而控制。目前,細胞凋亡研究日益受到重視。從某種程度上說,細胞凋亡與細胞的生長和分化同樣重要,是細胞生命的基本特征之一。細胞凋亡是一個非常復雜的生理