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《水浸束縛應激對大鼠下頜下腺內(nèi)瘦素表達的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、水浸束縛應激對大鼠下頜下腺內(nèi)瘦素表達的影響作者：趙豫鳳，劉廣忠，楊加周，苗乃周【關鍵詞】應激；水浸束縛；頜下腺；瘦素；大鼠 Effectofmersionrestraintstresssonleptinexpressioninsubmandibularglandofrats 【Abstract】AIM:Toobservethechangesofleptinexpressioninsubmandibularglandofratsfollomersionrestraintstressandtoexploretheeffectsandsignifica
2、nceofstressresponseonleptinsecretioninsubmandibulargland.METHODS:Tmersionrestraintstress(alcontrolgroup(n=10).Localizationanddistributionofleptininratsubmandibularglandmunohistochemistry,andtheconcentrationsofleptininserumandsubmandibularglandinedbyenzymelinkedimmunosorbentassa
3、y(ELISA).RESULTS：Leptinimmunoreactivecellsainlylocatedintheepithelialcellsofthegranularconvolutedandstriatedducts.TheimmunoplexesoftheductsbutnotinthenuclEi.Thestainingintensityforleptininthegranularconvolutedductuchhigherthanthatinstriatedduct.Theleptinstainingintheductsofsubm
4、andibularglandinandsubmandibularglandarkedlyparedalcontrolgroup(P<0.01).CONCLUSION:Leptinisandibulargland.andibulargland,andtheseresultssuggestedthatleptininsubmandibularglandmightbeinvolvedintheregulationofstressresponseprocess. 【Keymersionrestraint;submandibulargland;lept
5、in;rat 【摘要】目的：觀察應激狀態(tài)下大鼠頜下腺內(nèi)瘦素表達的變化，探討應激反應對頜下腺瘦素分泌的影響及其意義.方法：采用水浸束縛應激（ersionrestraint)組（n=10）和正常對照組（n=10）.采用水浸束縛應激模型［4］.乙醚麻醉下將大鼠四肢固定于特制的木板上，待動物清醒后，置于高約30cm的方形塑料桶內(nèi)，桶內(nèi)加入溫度為21±1℃的冷水，使水面至大鼠的胸骨劍突，經(jīng)10h后，即可成功誘發(fā)L注射器心內(nèi)取血2mL于4℃靜置2h，離心（7000r/min）20min取上清，-20℃保存?zhèn)溆?然后從頸部取出雙側頜下腺組織，一側頜下腺于-70℃
6、保存、留待ELISA檢測；另一側頜下腺組織入Bouins液固定24h后，常規(guī)脫水、石蠟包埋、制成厚5μm切片，分別裱貼于預先用APES(3aminopropyltriethoxysilane,Sigma公司)處理過的載玻片上，于37℃恒溫箱烤干備用. 1.2方法 1.2.1免疫組織化學染色兔抗瘦素多克隆抗體購自武漢博士德公司（Boster）；生物素標記的羊抗兔IgG以及ABC試劑盒均購自Sigma公司.根據(jù)免疫組化ABC染色程序，取制備好的石蠟切片入二甲苯脫蠟10min×2次，無水乙醇漂洗5min×2次.新鮮甲醇配制的3g/L(V/V)雙氧水漂洗
7、30min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶.0.01mol/LPBS(pH7.3)漂洗5min×3次.用15g/L(V/V)正常羊血清封閉30min；甩去正常羊血清后，滴加第一抗體兔抗瘦素（1∶200），4℃冰箱內(nèi)孵育過夜；PBS漂洗5min×3次，滴加生物素標記的羊抗兔IgG(1∶400)，室溫2h；PBS漂洗5min×3次，滴加ABC復合物1h(1∶200)；PBS漂洗5min×3次，DABH2O2顯色8~15min；常規(guī)脫水、透明、DPX封片.用正常兔血清替代瘦素抗體作為第一抗體進行染色作為陰性對照實驗. 1.2.4頜下腺及血清中瘦素的檢測瘦素ELI
8、SA試劑盒購自武漢博士德公司（Boster），具體操作步驟按試劑盒說明書進行.取凍存的頜下腺組織、稱重，用2
