資源描述：
《原核表達真核基因.docx》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、蜱鐵蛋白基因在大腸桿菌中的克隆和表達分析系別：生物工程班級：06-4組別：D組組員：廣慧娟學號：06031405關程程學號：06031404尹曉歡學號：06031427孫恒一學號：06031417劉博學號：06031413指導教師：劉寶全完成日期：2009-6-29目錄一、概述1二、蜱鐵蛋白DNA、MRNA、氨基酸序列的獲取21、蜱鐵蛋白DNA22、蜱鐵蛋白mRNA序列23、蜱鐵蛋白氨基酸序列3三、蜱鐵蛋白相關信息（網(wǎng)站、文獻查閱）3四、材料和方法41、材料41.1蜱的飼養(yǎng)及試驗動物41.2質(zhì)粒和宿主菌株42、方法
2、52.1蜱總RNA的分離及cDNA的合成52.2引物設計和PCR擴增目的基因72.3目的基因的克隆和測序82.4鐵蛋白基因的原核表達及親合純化102.5WesternBlot方法檢測微小牛蜱鐵蛋白（文獻查閱）12五、相關說明：131、表達載體的選擇132、克隆載體與表達載體的區(qū)別133、如何提高外源基因片段在原核細胞中的表達量13參考資料13一、概述蜱是一類以吸血為生的節(jié)肢動物，蜱類不僅在人、畜體上刺吸血液，造成宿主的血液損失，而且引起皮膚奇癢，傷口發(fā)炎、水腫等多種反應。更重要的是，作為人和動物的許多病原的傳播媒介
3、，包括細菌、真菌、病毒、立克次體、螺旋體和寄生原蟲等多種病原。微小牛蜱也是獸醫(yī)上常見的體外寄生蟲,是傳播牛疾病最多的一種蜱,可傳播牛巴貝斯蟲病、牛雙芽巴貝斯蟲病和牛邊緣邊蟲病。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)統(tǒng)計，世界上有80%的牛被侵襲，僅硬蜱給畜牧業(yè)造成的損失，全球每年就高達70億美元。長期以來，藥物滅蜱一直是蜱及蜱傳播疾病的主要控制手段，由于蜱抗藥性出現(xiàn)、食品安全和環(huán)境污染等問題,目前的藥物控制已顯現(xiàn)出它嚴重的局限性,迫切需要尋找新的防制策略。1995年研制出微小牛蜱的腸抗原Bm86的重組疫苗，它的成功使人們確信，
4、免疫控制是目前最有希望的方法之一。但該疫苗不足之處也十分明顯，該疫苗的局限性激勵有關學者尋找其他分子。生物技術和信息技術的快速發(fā)展為蜱的功能分子的研究提供了有力的手段。從現(xiàn)有的研究看，蜱體內(nèi)具有多種疫苗侯選價值的分子，例如，蜱鐵蛋白、抗凝血分子。、免疫調(diào)節(jié)分子等。蜱功能分子的具有良好的開發(fā)前景：1、作為抗蜱疫苗的應用，現(xiàn)在從蜱體分離出的許多抗原分子例如微小牛蟀Bm86以及本實驗分離的半胱氨酸蛋白鐵蛋白具有一定的免疫保護作用。2、抗病原傳播疫苗的應用。蜱的危害不僅是作為寄生蟲，更重要的作為傳播病原的媒介。如果能夠用從
5、蜱體分離出的特定病原的抗原對宿主進行免疫，使蜱叮咬宿主后，降低或使蜱喪失媒介能力，則能達到阻斷病原的傳播。3、尋找抗藥性對策。蜱抗藥性問題一直是藥物滅蜂的一個突出問題，且大量化學藥物的使用容易造成環(huán)境污染和食品污染。研究表明，蜱體內(nèi)一些酶分子是與抗藥性產(chǎn)生相關的，因此，這些分子的研究有助于尋找抗藥性對策。鐵是一種重要的營養(yǎng)元素，但它的富集能致毒。鐵蛋白是普遍存在于生物體內(nèi)的一種保守性較高的多功能多亞基的生物蛋白，其作用是貯存鐵和對生物體內(nèi)鐵含量進行調(diào)控，因此在生物體內(nèi)鐵含量過多時起到解毒的作用。1蜱是以吸血為生的寄
6、生蟲，宿主紅細胞中含有大量的鐵，據(jù)研究，蜱是利用鐵蛋白及其相關蛋白功能來處理大量的鐵以消除對自身的毒性。因此鐵蛋白是蜱體內(nèi)一種十分重要的功能分子，為了進行抗蜱疫苗的研制，本研究對微小牛蜱鐵蛋白編碼基因進行克隆、測序、表達和分析。二、蜱鐵蛋白DNA、mRNA、氨基酸序列的獲取1、蜱鐵蛋白DNA1GTTTTGCTTCAACAGTGATTGAACGAGCATCGCCAAACGTGCTCTCTCTCTCTTCCGATC61CTTTCTCGCTAAATTAATCTTGAAGTACAGTTTGAGATCCCGTCCGCCAAG
7、CAGCCGAAG121AAGATGGCCGCAACTCAGCCCCGTCAGAACTACCATGTCGATTGCGAAGCCCGCATCAAC181AAGCAGATCAACTTGGAACTCTACGCGAGCTACGTCTACACATCAATGGCCTACTACTTC241GATCGCGATGATGTGGCACTGCCGGGATTCCACAAGTTCTTCAAGAAGAGCAGCGATGAG301GAGCGTGAGCATGCCCAGAAGCTGATGAAGTATCAAAACATGCGCGGAGGGCGCGTGGT
8、G361CTGCAGGCGATACAGAAGCCATCGCGGGACGAATGGGGCGCAGGCTTGGACGCCATGCAG421GCTGCACTTGAGCTGGAGAAGACTGTCAACCAGTCACTGCTGGACTTGCACAAGCTGGCA481AACGATCATAATAACGCTCAGCTGTGCGACTTCCTGGAAAGCGAGTACCT
