山西梨屬主要栽培品種est-ssr指紋圖譜的構(gòu)建

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1、山西梨屬主要栽培品種EST-SSR指紋譜的構(gòu)建【摘要】：我國(guó)的梨屬（PyrusL.）植物種質(zhì)資源相當(dāng)豐富，山丙作為梨的主要產(chǎn)區(qū)之一也有很多品種。但巾于梨屬植物缺乏栽培種的野生種群、梨品種之間的形態(tài)差異較小等原因，形成了很多有爭(zhēng)議品種，導(dǎo)致現(xiàn)有梨的新品種得不到有效的保護(hù)，因而對(duì)梨品種進(jìn)行快速準(zhǔn)確的鑒定，對(duì)促進(jìn)我國(guó)梨種質(zhì)資源的利用和品種鑒定具右秉要的意義。（EST-SSR標(biāo)記充分利用現(xiàn)有的信息數(shù)據(jù)，避免構(gòu)建文庫(kù)及測(cè)序而獲得標(biāo)記的繁瑣步驟，開(kāi)發(fā)的標(biāo)記揭示的多態(tài)性較高，提供的信息量豐富。該標(biāo)記己廣泛用于物種分類、物種鑒定以及遺傳多樣性分析等研究中。）本研

2、究選用24個(gè)山西梨栽培品種為研究材料，采用EST-SSR分子標(biāo)記的方法分析梨品種間的遺傳多樣性，并構(gòu)建其特有的指紋圖譜。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如不：1.采用正交設(shè)計(jì)篩選、優(yōu)化及驗(yàn)證梨屬植物EST-SSR標(biāo)記中PCR反應(yīng)體系及程序。為確定PCR反應(yīng)的最佳體系，利用正交設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)梨屬植物的PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化。最終確立梨SSR-PCR最佳的反應(yīng)體系（10

3、iL）為：1.0

4、LiL10xPCRBufferTaqDNA聚合酶1.4U、Mg2+2.0mmol/L、DNA模板50ng、dNTPsO.lmmol/L、引物0.5（imol/L。此體系在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中得到

5、驗(yàn)證。2.幵發(fā)梨屬植物EST-SSR標(biāo)記引物，并進(jìn)行篩選驗(yàn)證。利用己公布的1752條梨屬植物EST序列，選取78對(duì)梨屬植物的EST-SSR引物。采用這78對(duì)引物對(duì)24個(gè)梨品種進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出558個(gè)等位位點(diǎn)，其中右30對(duì)引物能擴(kuò)增出336條大小在預(yù)期片段范圍內(nèi)，清晰的多態(tài)性條帶，多態(tài)位點(diǎn)百分率達(dá)60.2%oPIC值變化范圍在0.56-0.91，平均為0.75。其中，引物BRC0003、BRC0004、BRC00010和BRC00044這4對(duì)引物可以完全區(qū)分24個(gè)梨屬品種。3.采用EST-SSR標(biāo)記分析梨屬植物的遺傳多樣性。聚類分析把24個(gè)梨品種

6、分為5個(gè)類群。沙01和其余品種親緣關(guān)系最遠(yuǎn),中梨三號(hào)和蘋(píng)果梨、碩豐梨為一個(gè)類群;阿巴特、紅茄梨、早熟阿巴特、巴梨為一個(gè)類群，都屬于西洋梨種；其余15個(gè)品種聚為一類。結(jié)果顯示中梨三號(hào)和中華玉梨并不是同一品種，而玉露香梨和庫(kù)爾勒香梨親緣關(guān)系較近。4.采用EST-SSR標(biāo)記構(gòu)建出24個(gè)山西梨品種特有的指紋圖譜,能夠?qū)鎸僦参镞M(jìn)行鑒定,為建立梨樹(shù)植物指紋鑒定數(shù)據(jù)庫(kù)積累科學(xué)依據(jù)；利用引物BRC0003、BRC00010和BRC00044構(gòu)建了24個(gè)梨屬植物材料的指紋圖譜。為了直觀方便對(duì)每一個(gè)梨屬植物品種的鑒定，還利用10對(duì)核心引物構(gòu)建了每一個(gè)品種的指紋圖譜

7、。（這句話還需要推敲，意思不是很清楚）【關(guān)鍵詞】：梨引物鑒定EST-SSR【學(xué)位授予單位】：山西人學(xué)【學(xué)位級(jí)別】：碩士【學(xué)位授予年份】：2013【分類號(hào)】：S661.2【目錄】：中文摘要8-10ABSTRACT10-121文獻(xiàn)綜述12-181.1梨屬植物概述121.2梨品種鑒定方法12-171.2.1形態(tài)學(xué)鑒定及應(yīng)用12-131.2.2細(xì)胞學(xué)鑒定及應(yīng)用13-141.2.3同工酶鑒定及應(yīng)用141.2.4DNA分子標(biāo)記鑒定及應(yīng)用14-171.2.4.1RAPD14-151.2.4.2AFLP151.2.4.3ISSR151.2.4.4EST-SSR1

8、5-171.3本研究的目的意義17-182材料方法18-302.1實(shí)驗(yàn)材料18-192.2實(shí)驗(yàn)方法19-292.2.1提取梨屬植物的總DNA19-212.2.1.1配制所需試劑19-202.2.1.2提取流程20-212.2.1.3DNA濃度檢測(cè)212.2.2EST-SSR引物的設(shè)計(jì)合成21-262.2.2.1EST-SSR序列的查找212.2.2.2EST-SSR引物合成21-262.2.3PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化26-282.2.3.1PCR反應(yīng)體系優(yōu)化設(shè)計(jì)26-282.2.3.2PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測(cè)282.2.3.3最佳反應(yīng)體系的確定282.2

9、.4聚丙烯凝膠電泳28-292.2.4.1藥品制備282.2.4.2聚丙烯酰胺凝膠電泳28-292.2.4.3聚丙烯酰胺凝膠的銀染染色292.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)29-303結(jié)果分析30-373.1提取的DNA濃度質(zhì)量檢測(cè)303.2PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化30-323.3EST-SSR標(biāo)記的多態(tài)性32-333.424個(gè)梨屬植物品種鑒定及親緣關(guān)系33-353.524個(gè)梨品種指紋圖譜構(gòu)建35-374討論37-394.1梨EST-SSR標(biāo)記的開(kāi)發(fā)374.2梨DNA提取及PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化374.324份梨材料的親緣關(guān)系37-384.4梨品種指紋圖譜38-395結(jié)論

10、39-40參考文獻(xiàn)40-45致謝45-46個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式46-47攻讀學(xué)位期間取得的研宄成果47-49本論文購(gòu)買(mǎi)請(qǐng)聯(lián)系頁(yè)眉網(wǎng)站。