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《藻毒素復(fù)合污染對(duì)魚(yú)體的免疫毒性研究【開(kāi)題報(bào)告】》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、畢業(yè)論文開(kāi)題報(bào)告環(huán)境科學(xué)藻毒素復(fù)合污染對(duì)魚(yú)體的免疫毒性研究一、選題的背景和意義1.選題背景湖泊富營(yíng)養(yǎng)化導(dǎo)致的藍(lán)藻水華已成為國(guó)內(nèi)外普遍關(guān)注的環(huán)境問(wèn)題，它所帶來(lái)的主耍危害Z—是產(chǎn)生的藻毒素對(duì)魚(yú)類(lèi)的影響。在［1發(fā)現(xiàn)的藻毒素屮，微囊藻毒素(MCs)的分布廣、毒性大、危害嚴(yán)重，而備受關(guān)注。闡述了MCs對(duì)魚(yú)類(lèi)的影響。微囊藻毒索能干擾胚胎的發(fā)育，降低孵化率，增加畸形率，影響存活率，胚胎孵化受微囊藻毒素影響還具有劑量依賴(lài)效丿野外室內(nèi)實(shí)驗(yàn)均表明尙類(lèi)暴露于微囊藻毒素后不僅可在肝臟中富集還可在肌肉、腸道等組織器官中快速積累；對(duì)魚(yú)類(lèi)進(jìn)行組織病理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MCs可導(dǎo)致肝臟、腎臟、心臟、腦、鮑等組織受
2、損；MCs在魚(yú)體中的解毒過(guò)程可能開(kāi)始于由谷胱甘肽S?轉(zhuǎn)移酶催化的還原型谷胱甘肽的結(jié)合反應(yīng)；MCs還可影響?hù)~(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)、行為和血清生化指標(biāo)，此外，還具有一定的免疫毒性。2.選題意義通過(guò)比較兩種不同的MCs對(duì)魚(yú)的毒效應(yīng)及魚(yú)不同組織對(duì)MCs生化響應(yīng)的差異，探討并歸納MCs的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制和分了作用機(jī)制以及在食物鏈中傳遞過(guò)程中對(duì)人類(lèi)造成的潛在影響。為探討MCs的致再機(jī)理以及對(duì)人體的危害提供進(jìn)一步的參考依據(jù)。二、研究目標(biāo)與主要內(nèi)容1.研究目標(biāo)兩種典型微囊藻毒素MCLR和MCRR體外低劑量復(fù)合條件下對(duì)尙體的免疫毒性影響。2?主耍內(nèi)容(1)藻毒素MCLR單一作用下對(duì)魚(yú)體免疫細(xì)胞毒性；(2)藻毒
3、索MCRR單一作用下對(duì)魚(yú)體免疫細(xì)胞毒性；(3)不同濃度MCLR和MCRR復(fù)合作用下對(duì)血體免疫細(xì)胞毒性；三、擬釆取的研究方法、研究手段及技術(shù)路線(xiàn)、實(shí)驗(yàn)方案等1.1研究對(duì)彖質(zhì)量為一斤左右的鯽魚(yú)若干，在實(shí)驗(yàn)室馴養(yǎng)一段時(shí)間之后，使得魚(yú)的一般性狀都基木相同Z后才作為被研究的對(duì)象。1.2實(shí)驗(yàn)方法取鯽魚(yú)體屮主要免疫器官腎臟和脾臟，剪碎之后，作為樣詁采集。25mL燒杯裝一定量的PBS待用，用酒精棉將魚(yú)休消毒。從排泄口至胸鰭，然后沿胸鰭及排泄口垂直剪至背部，將魚(yú)肚沿剪切線(xiàn)向外翻，觀(guān)察到內(nèi)臟里冇兩條暗紅色組織即脾臟。小心用彎頭鐵了取出至PBS中，取完Z后用鐵了彎頭處將內(nèi)臟拉至肚了外面會(huì)在背部
4、發(fā)現(xiàn)兩塊對(duì)稱(chēng)的有薄膜包背的組織，即腎臟。小心取用手術(shù)剪剪斷連著的線(xiàn)，至此，殺仇取臟步驟完成。1.3樣品的實(shí)驗(yàn)室制備(1)用PBS漂洗至溶液基本透明，燒去多余的血及雜質(zhì)。(2)用手術(shù)剪將取出物剪碎，剪5min以上，剪成勻漿狀。(3)用100目不銹鋼網(wǎng)篩過(guò)濾至小燒杯中50mL,將25mL潤(rùn)洗后一并倒入至64mL左右分離液。(4)取16根無(wú)菌試管，分別加入4mL淋巴細(xì)胞分離液，然后沿試管壁小心慢慢加入4mL細(xì)胞懸液(混勻)必須保證溶液的上下分層。加的時(shí)候耍越慢越好。(5)離心設(shè)定：4000r?min'1,離心20min。(6)小心仔細(xì)吸收交界處呈乳白狀云霧層尙新試管屮，再次離心
5、5min,去除上清液。(7)取適量于Nikon顯微鏡下計(jì)數(shù)，結(jié)果每小格二6個(gè)，細(xì)胞密度為6X400X104.(8)將細(xì)胞接種于24孔板，密度為1.8X106個(gè)/mL/孔，14孔于27°C培養(yǎng)箱屮培養(yǎng)待用。(ImL)(9)取MCCR20mg/L,配置1Ug/L,10Ug/L,50ug/L,100ug/L,500Ug/L,1000Ug/L處理，誘導(dǎo)12小時(shí)，準(zhǔn)備2個(gè)平行樣。(1)12小時(shí)后，小心將培養(yǎng)液離心(2000G10min)棄上清液。(為避免失敗，取/3屯泳，后備用)1.4DMA損傷實(shí)驗(yàn)研究方法取3.2.2中步驟6淋巴細(xì)胞(106cell/mL)用受試毒素(3.1.2)
6、處理12h后,用愛(ài)思進(jìn)公司DNA小量提取試劑盒提取淋巴細(xì)胞DNA,運(yùn)用瓊脂糖凝膠電泳法:制0.8%瓊脂糖凝膠，后按澳酚藍(lán)：DNA1:1加樣，110V,電泳30min后EB染色,觀(guān)察，分析毒素對(duì)DNA損傷情況。1.5分析檢測(cè)方法1.5.1運(yùn)用細(xì)胞活性MTT檢測(cè)法，對(duì)毒素作用下淋巴細(xì)胞的存活率進(jìn)行檢測(cè)。1.5.2運(yùn)用透射屯鏡觀(guān)察毒索作用下，魚(yú)體淋巴細(xì)胞的凋亡情況。1.5.3運(yùn)用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)藻毒素對(duì)淋巴細(xì)胞DNA的損傷情況。四、參考文獻(xiàn)[1]WorldHealthOrganization.Algaeandcyanobacteriainfreshwater//Guide
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