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《藻毒素復(fù)合污染對魚體的免疫毒性研究【開題報告】》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、畢業(yè)論文開題報告環(huán)境科學(xué)藻毒素復(fù)合污染對魚體的免疫毒性研究一、選題的背景和意義1.選題背景湖泊富營養(yǎng)化導(dǎo)致的藍(lán)藻水華已成為國內(nèi)外普遍關(guān)注的環(huán)境問題，它所帶來的主耍危害Z—是產(chǎn)生的藻毒素對魚類的影響。在［1發(fā)現(xiàn)的藻毒素屮，微囊藻毒素(MCs)的分布廣、毒性大、危害嚴(yán)重，而備受關(guān)注。闡述了MCs對魚類的影響。微囊藻毒索能干擾胚胎的發(fā)育，降低孵化率，增加畸形率，影響存活率，胚胎孵化受微囊藻毒素影響還具有劑量依賴效丿野外室內(nèi)實驗均表明尙類暴露于微囊藻毒素后不僅可在肝臟中富集還可在肌肉、腸道等組織器官中快速積累；對魚類進行組織病理檢測發(fā)現(xiàn)MCs可導(dǎo)致肝臟、腎臟、心臟、腦、鮑等組織受
2、損；MCs在魚體中的解毒過程可能開始于由谷胱甘肽S?轉(zhuǎn)移酶催化的還原型谷胱甘肽的結(jié)合反應(yīng)；MCs還可影響魚類的生長、行為和血清生化指標(biāo)，此外，還具有一定的免疫毒性。2.選題意義通過比較兩種不同的MCs對魚的毒效應(yīng)及魚不同組織對MCs生化響應(yīng)的差異，探討并歸納MCs的轉(zhuǎn)運機制和分了作用機制以及在食物鏈中傳遞過程中對人類造成的潛在影響。為探討MCs的致再機理以及對人體的危害提供進一步的參考依據(jù)。二、研究目標(biāo)與主要內(nèi)容1.研究目標(biāo)兩種典型微囊藻毒素MCLR和MCRR體外低劑量復(fù)合條件下對尙體的免疫毒性影響。2?主耍內(nèi)容(1)藻毒素MCLR單一作用下對魚體免疫細(xì)胞毒性；(2)藻毒
3、索MCRR單一作用下對魚體免疫細(xì)胞毒性；(3)不同濃度MCLR和MCRR復(fù)合作用下對血體免疫細(xì)胞毒性；三、擬釆取的研究方法、研究手段及技術(shù)路線、實驗方案等1.1研究對彖質(zhì)量為一斤左右的鯽魚若干，在實驗室馴養(yǎng)一段時間之后，使得魚的一般性狀都基木相同Z后才作為被研究的對象。1.2實驗方法取鯽魚體屮主要免疫器官腎臟和脾臟，剪碎之后，作為樣詁采集。25mL燒杯裝一定量的PBS待用，用酒精棉將魚休消毒。從排泄口至胸鰭，然后沿胸鰭及排泄口垂直剪至背部，將魚肚沿剪切線向外翻，觀察到內(nèi)臟里冇兩條暗紅色組織即脾臟。小心用彎頭鐵了取出至PBS中，取完Z后用鐵了彎頭處將內(nèi)臟拉至肚了外面會在背部
4、發(fā)現(xiàn)兩塊對稱的有薄膜包背的組織，即腎臟。小心取用手術(shù)剪剪斷連著的線，至此，殺仇取臟步驟完成。1.3樣品的實驗室制備(1)用PBS漂洗至溶液基本透明，燒去多余的血及雜質(zhì)。(2)用手術(shù)剪將取出物剪碎，剪5min以上，剪成勻漿狀。(3)用100目不銹鋼網(wǎng)篩過濾至小燒杯中50mL,將25mL潤洗后一并倒入至64mL左右分離液。(4)取16根無菌試管，分別加入4mL淋巴細(xì)胞分離液，然后沿試管壁小心慢慢加入4mL細(xì)胞懸液(混勻)必須保證溶液的上下分層。加的時候耍越慢越好。(5)離心設(shè)定：4000r?min'1,離心20min。(6)小心仔細(xì)吸收交界處呈乳白狀云霧層尙新試管屮，再次離心
5、5min,去除上清液。(7)取適量于Nikon顯微鏡下計數(shù)，結(jié)果每小格二6個，細(xì)胞密度為6X400X104.(8)將細(xì)胞接種于24孔板，密度為1.8X106個/mL/孔，14孔于27°C培養(yǎng)箱屮培養(yǎng)待用。(ImL)(9)取MCCR20mg/L,配置1Ug/L,10Ug/L,50ug/L,100ug/L,500Ug/L,1000Ug/L處理，誘導(dǎo)12小時，準(zhǔn)備2個平行樣。(1)12小時后，小心將培養(yǎng)液離心(2000G10min)棄上清液。(為避免失敗，取/3屯泳，后備用)1.4DMA損傷實驗研究方法取3.2.2中步驟6淋巴細(xì)胞(106cell/mL)用受試毒素(3.1.2)
6、處理12h后,用愛思進公司DNA小量提取試劑盒提取淋巴細(xì)胞DNA,運用瓊脂糖凝膠電泳法:制0.8%瓊脂糖凝膠，后按澳酚藍(lán)：DNA1:1加樣，110V,電泳30min后EB染色,觀察，分析毒素對DNA損傷情況。1.5分析檢測方法1.5.1運用細(xì)胞活性MTT檢測法，對毒素作用下淋巴細(xì)胞的存活率進行檢測。1.5.2運用透射屯鏡觀察毒索作用下，魚體淋巴細(xì)胞的凋亡情況。1.5.3運用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測藻毒素對淋巴細(xì)胞DNA的損傷情況。四、參考文獻[1]WorldHealthOrganization.Algaeandcyanobacteriainfreshwater//Guide
7、linesforsaferecreationalwaterenvironments,Vol1.coastalandfreshwaters.Geneva,Switzerland,2003:136-15&[2]DittmannE,NeilanBA,BornerT.InsertionalmutagenesisofapeptidesynthetasegenethatisresponsibleforhepatotoxinproductioninthecyanobacteriumMicrocystisaeruginosaPCC7806.M
