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《hbv感染不同狀態(tài)下樹(shù)突狀細(xì)胞生物學(xué)的的研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、摘要目的樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)是一種最具潛能的抗原提呈細(xì)胞，其對(duì)抗原進(jìn)行捕獲、加工，處理后提呈給組織相容性復(fù)合物(majorhistocompabilitycomplex，MHC)．I、II類(lèi)分子，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的增殖，在增強(qiáng)或調(diào)節(jié)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中起著決定性作用。乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染者DCs的相關(guān)研究目前愈來(lái)愈受到眾多學(xué)者的關(guān)注。本課題擬研究慢性乙型肝炎不同感染階段外周血來(lái)源DCs的功能特點(diǎn)，比較DCs中HBV不同滴度時(shí)DCs的功能差異，并研究CpG0DN能否促進(jìn)DCs成熟，增強(qiáng)DCs功能，
2、從而進(jìn)一步揭示HBV感染不同狀態(tài)下DCs的免疫功能。方法本研究對(duì)10例慢性乙型肝炎患者、10例HBV攜帶者及l(fā)O例健康對(duì)照者外周血來(lái)源DCs進(jìn)行體外培養(yǎng)，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)DCs的表面分子HLA．DR、CD80、CD86的表達(dá)，ELISA檢測(cè)DCs培養(yǎng)上清IL．12水平，以比較DCs在慢性乙型肝炎不同感染階段的功能特點(diǎn)；同時(shí)運(yùn)用熒光定量PCR的方法，對(duì)12例慢性乙型肝炎血清HBV。DNA陽(yáng)性患者及10例血清HBV—DNA陰性患者外周血來(lái)源DCs內(nèi)的HBV．DNA進(jìn)行了檢測(cè)，并比較DCs中HBV不同滴度時(shí)DCs的功能差異；通過(guò)予以含非甲基化CpG基序的寡脫氧核
3、苷酸鏈(unmethylatedCpGmotifcontainingoligodeoxynucleotides，CpGODN)干預(yù)，研究CpGODN能否有效促進(jìn)DCs成熟，增強(qiáng)DCs功能。厶七甲"171木(1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，體外用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI．1640完全培養(yǎng)基(iJHGM．CSF矛NIL一4)誘導(dǎo)人的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)來(lái)培養(yǎng)DCs，24小時(shí)后可見(jiàn)貼壁單核細(xì)胞聚集成大小不等葡萄串狀，粘附于培養(yǎng)板底，第3天可見(jiàn)這部分細(xì)胞體積增大，第4天可見(jiàn)部分細(xì)胞懸浮于細(xì)胞培養(yǎng)液
4、，第5天可見(jiàn)這部分細(xì)胞數(shù)目增多，部分細(xì)胞出現(xiàn)許多毛刺。第7天培養(yǎng)液中飄浮著大量有明顯樹(shù)突狀的大個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)。將培養(yǎng)7天的DCs收集在透射電鏡下觀察，每個(gè)視野充滿DCs，可見(jiàn)細(xì)胞體積較大，細(xì)胞表面突起比較豐富，胞漿內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，線粒體結(jié)構(gòu)較清楚，溶酶體豐富，核大而圓，核膜清晰，染色質(zhì)分布較均勻。慢性乙型肝炎患者及HBV攜帶者HLA．DR、CD80和CD86的表達(dá)率較正常對(duì)照組普遍降低，但HLA．DR、CD80和CD86的表達(dá)水平在慢性乙型肝炎患者及HBV攜帶者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ELISA檢測(cè)培養(yǎng)第7天DCs上清IL．12水平，發(fā)現(xiàn)在DCs培養(yǎng)上清液中
5、，IL．12的表達(dá)水平在慢性乙型肝炎患者及攜帶者明顯低于正常人，而慢性乙型肝炎患者與攜帶者之間則無(wú)明顯差異。(2)對(duì)12例慢性乙型肝炎血清HBV—DNA陽(yáng)性患者及10例血清HBV．DNA陰性患者外周血來(lái)源DCs內(nèi)的HBV．DNA進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：12例血清HBV—DNA陽(yáng)性患者，其中有7例其DCs內(nèi)可檢測(cè)到HBV．DNA，5例DCs內(nèi)未檢出HBV．DNA，DCs內(nèi)HBV．DNA檢出率為58．3％。流式細(xì)胞儀分析顯示，正常人的皿A．DR、CD80和CD86的表達(dá)陽(yáng)性率均在58％以上，而慢性乙型肝炎血清HBV-DNA陽(yáng)性組及血清HBV-DNA陰性組HLA—DR、CD8
6、0和CD86的表達(dá)率較正常人組普遍降低，尤以血清HBV-DNA陽(yáng)性組下降更為明顯。7例DCsHBV-DNA陽(yáng)性組及15例DCsHBV-DNA陰性組甩A．DR、CD80和CD86的表達(dá)率亦較正常II人組普遍降低，尤以DCsHBV-DNA陽(yáng)性組下降更為明顯。DCs培養(yǎng)上清IL．12水平在血清HBV-DNA陽(yáng)性組明顯低于血清HBV-DNA陰性組及正常人組，血清HBV-DNA陽(yáng)性組又低于血清HBV-DNA陰性組。而IL．12的表達(dá)水平在DCsHBV-DNA陽(yáng)性組明顯低于DCsHBV-DNA陰性組及正常人組，DCsHBV-DNA陰性組又低于正常人組。相關(guān)分析顯示，DCs
7、表面分子的表達(dá)及DCs分泌IL一12水平與血清及DCsHBV載量均呈顯著負(fù)相關(guān)。(3)將培養(yǎng)第6天的DCs，加入CpGODN繼續(xù)培養(yǎng)24d,時(shí)后，透射電鏡觀察CpGODN刺激后DCs與完全培養(yǎng)基對(duì)照組DCs相比，其表面的突起豐富、增粗，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，空泡減少甚至消失。用流式細(xì)胞儀分析顯示，CpGODN束U激組CD80、CD86及HLA．DR的表達(dá)陽(yáng)性率在慢性乙型肝炎組、HBV攜帶者組及正常人組均完全培養(yǎng)基對(duì)照組明顯升高。完全培養(yǎng)基對(duì)照組甩A．DR、CD86、CD80的表達(dá)陽(yáng)性率在慢性乙型肝炎組、攜帶者組及正常人組之間比較發(fā)現(xiàn)：慢性乙型肝炎組及攜帶者組HLA．
8、DR、CD86、CD80的表達(dá)陽(yáng)性率較
