孕期哺乳期砷暴露對仔鼠腦組織sema3a表達影響

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1、孕期／n甫gL期砷暴露對仔鼠腦組織Sema3a表達影響計：學位論文：29頁表格：6個插圖：4幅韓雪榕指導(dǎo)教師：樸豐源教授申請學位級別：碩士學位專業(yè)名稱：勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學論文提交日期：2012年4月論文答辯日期：2012年5月學位授予單位：大連醫(yī)科大學學位授予日期：2012年6月評閱人：答辯委員會主席：獨創(chuàng)性聲明＼I惻必炒蝌Y2282707本人聲明所呈交的學位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得大連醫(yī)科大學或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對

2、本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：簽字日期：姓年立月丑日目錄一、摘要??????????????????????????1(一)中文摘要??????????????????????1(二)英文摘要??????????????????????3二、正文??????????????????????OOOOOO?5(一)前言???????????????????????5(二)材料與方法?????????????????????6(三)結(jié)果??···?????······??···?···??OOD???···12(四)討論????????????????

3、???????15(五)結(jié)論???????????????????????18(六)參考文獻?????????????????OODO019三、綜述?????????????????????????2l(一)綜述??????????????????????21(二)參考文獻?OOOO0OO????????????????26四、附錄?????????????????????????28五、致謝?????????????????????????29孕期／哺乳期砷暴露對仔鼠腦組織Sema3a表達影響碩士生姓名：韓雪榕指導(dǎo)教師：樸豐源教授．專業(yè)名稱：勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學摘要背景目前環(huán)境砷污染已經(jīng)成

4、為一個日益突出的健康問題，慢性砷及其化合物暴露可導(dǎo)致砷在體內(nèi)蓄積，從而引起多系統(tǒng)損傷。大量流行病學及動物實驗證明，慢性砷暴露對人類及動物具有神經(jīng)毒性作用，尤其在胎兒出生前后及發(fā)育階段對砷的神經(jīng)毒性更為敏感。因此，孕期／哺乳期低水平砷暴露所致神經(jīng)系統(tǒng)損傷及其機制研究，已成為當今各國學者關(guān)注的一個熱點。學習和記憶是神經(jīng)系統(tǒng)所具有的重要功能之一。目前，已有許多學者證明了突觸可塑性與學習記憶密切相關(guān)。突觸可塑性分為功能可塑性和結(jié)構(gòu)可塑性，其中突觸結(jié)構(gòu)可塑性的建立必須通過軸突末端生長錐來實現(xiàn)。有研究表明發(fā)育期砷暴露可影響軸突的生長，而sema3a作為軸突導(dǎo)向因子對軸突的正常生長起重要調(diào)控作用。由此，孕

5、期／哺乳期砷暴露是否影響Sema3a表達引起我們的關(guān)注。目的觀察砷對仔鼠發(fā)育時期腦組織中軸突導(dǎo)向因子sema3a在基因和蛋白水平表達的影響，為闡明腦發(fā)育期砷暴露對學習記憶影響的毒作用機制提供靶基因依據(jù)。方法昆明孕小鼠按體重隨機分為飲用水對照組、1ppmAs203染毒組、4ppmAs203染毒組、16ppmAs203染毒組，每組6只，從孕0天起孕期和哺乳期對母鼠連續(xù)染毒，產(chǎn)后3周停止哺乳。于仔鼠出生后第21天分批脫頸處死，留取腦組織，置于．80℃冷凍固化。行為學試驗測試孕期砷暴露至產(chǎn)后21天小鼠的學習記憶能力。基因芯片技術(shù)篩選仔鼠腦發(fā)育相關(guān)基因，用PCR技術(shù)檢測小鼠腦組織軸突導(dǎo)向因子sema3

6、a在mRNA水平的表達，用Westernblot方法檢澳[Isema3a蛋白表達。用免疫組化方法檢測生長相關(guān)蛋白(neuronalgrowthassociatedprotein，GAP43)在生長錐細胞膜的表達分布。采用SPSSI1．5統(tǒng)計軟件，用單因素方差分析(ANOVA)，比較各染砷組與對照組間的統(tǒng)計學差異，兩組間比較用LSD法分析，以P<0．05表示統(tǒng)計學差異顯著。結(jié)果跳臺實驗結(jié)果顯示，隨著染毒劑量的增加，仔鼠從平臺跳下的潛伏期縮短，發(fā)生錯誤次數(shù)增加?；蛐酒Y選出與腦發(fā)育相關(guān)的基因sema3a、RhoA、Rockl、Rock2、cRMPs的表達顯著上調(diào)。Real．timeRT．PCR

7、、Westernblot檢測結(jié)果顯示，出生2l天仔鼠腦組織Sema3a在基因和蛋白水平的表達在染砷組顯著升高，且呈劑量．反應(yīng)關(guān)系(p