wrky轉(zhuǎn)錄因子sidrw1和nac轉(zhuǎn)錄因子sisrn1在番茄抗性反應(yīng)中的功能研究

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1、分類號：墜三2：!密級：玉單位代碼：!Q三三5學(xué)號：!Q墨!墨Q5墨洳≥：j▲嗜博士學(xué)位論文⑧WRKY轉(zhuǎn)錄因子SIDRWl和NAC轉(zhuǎn)錄因子SISRNl在番茄抗性反應(yīng)中的功能研究提交日期2Q!壟生!且中國·杭州單位代碼：研究生學(xué)號：10816058WRKY轉(zhuǎn)錄因子SIDRWl和NAC轉(zhuǎn)錄因子SISRNl在番茄抗性反應(yīng)中的功能研究論文答辯日期2012．3．10答辯委員會主席周雪堊數(shù)援一(姓名、職稱、單位)論文評閱人巫囪隆名遷閱一(姓名、職稱、單位)㈣卯燃一FunctionalanalysisoftomatoWRKYtranscri

2、ptionfactorSIDRWlandNACtranscriptionfactorSISRNlintheregulationofdefenseresponsebyLiuBoAdissertationsubmittedinpartialfulfillmentoftherequirementsforthedegreeofDoctorofPhilosophy1nPlantPathologyatZHEJIANGUNIVERSITYSupervisor：Prof．SongFengmin。gHangzhou，Zhejiang310058

3、People’SRepublicofChinaJanuary,2012III浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中j再包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得逝姿盤堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解迸婆盤堂有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論

4、文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝姿盤堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日致謝時光荏苒!轉(zhuǎn)眼學(xué)生生涯行將結(jié)束!回首博士生活，感慨頗多。這是個收獲的季節(jié)，學(xué)習(xí)了知識，收獲了技能，增長了對生活的理解。有喜就有憂，實驗中難免會遇到挫折和疑惑，生活中難免會有迷茫和摩擦。幸好身邊有老師的指點(diǎn)，還有親朋好友的理解、支持和鼓勵。才能使我在消沉?xí)r及時重

5、拾信心，才能使我的實驗得以順利的完成，才能使我的最后幾年學(xué)生生涯增添許多美好的回憶。值此論文完成之際，向所有關(guān)心和幫助過我的人們表示由衷的感謝!首先，我要感謝恩師宋鳳鳴教授。本論文是在導(dǎo)師的指導(dǎo)和關(guān)懷下完成的，從選題立意、實驗方案到研究結(jié)果分析整理、論文修改以至最終定稿，都凝聚著導(dǎo)師無數(shù)的心血和智慧。特別是他對科研的熱愛，對工作的嚴(yán)謹(jǐn)，以及他樂觀的生活態(tài)度，都將對我以后的人生路產(chǎn)生莫大的影響。其次，感謝實驗室所有成員在科研上給我的指導(dǎo)和幫助，同時感謝他們在生活中的陪伴以及給予我的幫助、信任和包容。最后，特別感謝我的父母、妹妹以

6、及所有其他親朋。是他們的愛和理解，讓我在曲折的前進(jìn)道路上無后顧之憂，樂觀前行!V劉波2012-1-9于紫金港摘要轉(zhuǎn)錄因子作為復(fù)雜的信號網(wǎng)絡(luò)中的成員，在調(diào)節(jié)植物應(yīng)對來自周圍環(huán)境因子脅迫的過程中發(fā)揮著重要的作用。其中，WRKY,NAC等轉(zhuǎn)錄因子家族成員在植物生長發(fā)育和抗逆等過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)功能。而目前關(guān)于這兩個轉(zhuǎn)錄因子家族的研究主要集中在水稻和擬南芥中，番茄等其他植物中的研究很少。本文從番茄中克隆了12個NAC和6個WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因，并且主要利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)等技術(shù)鑒定了它們在番茄抵抗病原菌以及非生物脅迫

7、過程中的作用，初步篩選出2個具有重要調(diào)節(jié)功能的基因SIDRWl(defense．relatedWRKY1)和SISRNl(stress．relatedNAC1)。實驗結(jié)果表明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子S1DRWl在番茄與灰霉互作過程中是一個正調(diào)控因子。分析發(fā)現(xiàn)，WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因SIDRWl編碼一個由360個氨基酸組成的蛋白，根據(jù)推測其分子量大約為39．7kDa，等電點(diǎn)為8．13。而且，它在序列上與另外兩個番茄WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因SIWRKYl和SlWRKY2分別具有99％和91％的相似度。進(jìn)一步對SIDRWl和SIWRKYl的OR

8、F氨基酸序列比對分析發(fā)現(xiàn)，這兩個基因為同一基因。通過實驗手段驗證了S1DRWl的轉(zhuǎn)錄激活活性，結(jié)果表明，它可能是一個轉(zhuǎn)錄抑制子。GFP融合蛋白分析顯示，該基因定位于細(xì)胞核內(nèi)。接種灰霉病菌后，SIDRWl在番茄葉片內(nèi)的表達(dá)在接種后24h(24hpi)突然升高，48hpi達(dá)到高峰