nacl脅迫對黃瓜種子萌發(fā)的影響及dna甲基化的msap分析

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1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)2013,46(8):1646-1656ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2013.08.014NaCl脅迫對黃瓜種子萌發(fā)的影響及DNA甲基化的MSAP分析黃韞宇,張海軍,邢燕霞,齊艷,孫倩倩,周春蕾,趙冰,郭仰東(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院,北京100193)摘要:【目的】研究黃瓜種子萌發(fā)過程中DNA甲基化動態(tài)變化情況以及外源施加NaCl對種子萌發(fā)及種子DNA甲基化水平的影響,探索DNA甲基化在黃瓜種子萌發(fā)過程及NaCl脅迫反應(yīng)

2、中的作用。【方法】運用甲基化敏感擴-1增多態(tài)性(methylationsensitiveamplifiedpolymorphism,MSAP)技術(shù),分析0、150、200mmol·LNaCl處理下,黃瓜種子萌發(fā)過程(0、1、2、4、6、8d)的DNA甲基化水平及動態(tài)變化情況?!窘Y(jié)果】MSAP結(jié)果顯示,黃瓜種子CCGG位點的甲基化水平約15.25%,以雙鏈甲基化方式為主。種子中DNA甲基化水平在萌發(fā)1—2d略有升高,而在整個萌發(fā)過程中呈下降趨勢;NaCl處理加劇了甲基化的變化幅度,并使萌發(fā)末期的甲基化水平更低。萌發(fā)過程中

3、甲基化升高和降低同時發(fā)生,分別在不同萌發(fā)時期占主導(dǎo),不同變化類型中CG/CHG(H=A,T,C)位點胞嘧啶甲基化同時變化的類型占主導(dǎo)。甲基化變化同時發(fā)生在編碼序列和非編碼序列中。【結(jié)論】黃瓜種子萌發(fā)過程的DNA甲基化表現(xiàn)出復(fù)雜性,甲基化和去甲基化進(jìn)程同時進(jìn)行,并具有時空特異性。NaCl處理降低了種子基因組甲基化水平的穩(wěn)定性,對種子萌發(fā)有抑制作用。關(guān)鍵詞:黃瓜;萌發(fā);DNA甲基化;NaCl;甲基化敏感擴增多態(tài)性EffectsofNaClStressonSeedGerminationandDNAMethylationSta

4、tusDetectedbyMSAPAnalysisinCucumberHUANGYun-yu,ZHANGHai-jun,XINGYan-xia,QIYan,SUNQian-qian,ZHOUChun-lei,ZHAOBing,GUOYang-dong(CollegeofAgricultureandBiotechnology,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193)Abstract:【Objective】Theobjectivesofthisstudyweretoanalyze

5、thecytosinemethylationdynamicsduringcucumberseedgerminationandtoassesstheeffectofNaCltreatmentonseedgerminationandDNAmethylationstatus.Moreover,theroleofDNAmethylationonseedgerminationandsaltstressadaptationwasstudiedatthesametime.【Method】Methylationsensitiveamp

6、lifiedpolymorphism(MSAP)methodwasusedtoanalyzethelevelandvariationpatternsofDNAmethylationatdifferenttimes(0,1,2,4,6,8d)duringcucumberseedgerminationindifferentNaCltreatments(0,150,200mmol·L-1).【Result】MSAPresultsshowedthatthemethylationlevelincucumberdryseedswa

7、s15.25%,mainlyinfullmethylationpattern.ThelevelofglobalDNAmethylationdecreasedduringthewholegerminationprocess,withaslightincreaseattheearlystages(1-2d).NaCltreatmentaggravatedthesechanges,andmadethefinallevelofDNAmethylationlower.Hypermethylationandhypomethylat

8、ionhappenedsimultaneously,andpredominatedatdifferentgerminationstages.Amongdifferentchangetypes,CG/CHG(H=A,T,C)simultaneouschangeswerethedominatingtypes.DNAmethylatio

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