正交試驗(yàn)優(yōu)選荔枝草中總黃酮的提取工藝 (2)

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1、正交試驗(yàn)優(yōu)選荔枝草中總黃酮的提取工藝摘要目的：針對(duì)從荔枝草中提取總黃酮的操作工藝進(jìn)行提升優(yōu)化。方法：采用紫外分光光度法對(duì)荔枝草中總黃酮的含量進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)考察相關(guān)因素如溶劑濃度、溶劑用量、提取溫度、提取時(shí)間等對(duì)結(jié)果的影響。結(jié)果：添加20倍量的70%C2H5OH，80℃提取120min，總黃酮提取率為6.86%。結(jié)論：優(yōu)化后的提取工藝整體簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，在實(shí)際生產(chǎn)活動(dòng)中具有良好應(yīng)用價(jià)值，可用于工業(yè)提取總黃酮。關(guān)鍵詞荔枝草；正交試驗(yàn)；總黃酮；提取工藝引言荔枝草屬于唇形科鼠尾草屬植物，針對(duì)荔枝草的現(xiàn)代研究結(jié)果顯示其含有多種成分，主要成分包括黃酮、木質(zhì)素、酚類、揮發(fā)油和甾醇等各種成分[1]

2、。本人通過(guò)文獻(xiàn)得知，荔枝草中主要成分為黃酮，預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)總黃酮中含有蘆丁，擬以蘆丁為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)荔枝草中總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定。荔枝草性涼，在醫(yī)藥方面的作用主要包括清熱解毒、涼血利尿、消除水腫等；同時(shí)還可以用來(lái)治療痔瘡腫痛、乳腺炎、出血等，同時(shí)針對(duì)跌打損傷也具有良好效果[2]；荔枝草可以用于多種疾病的治療，臨床上常用于急性扁桃體炎、宮頸糜爛等。[3]。本文主要通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，分析相關(guān)因素如溶劑濃度、溫度、提取時(shí)間、溫度等對(duì)結(jié)果的影響，從而找出最優(yōu)提取方案。。1材料1.1儀器1.2試藥荔枝草藥品來(lái)自于廣西大明山，蘆丁，試劑等均為分析純。2方法和結(jié)果2.1總黃酮含量測(cè)定122.1.1對(duì)

3、照品蘆丁溶液的制備稱取10.9mg的蘆丁樣品，將其放入容量瓶中，滴加70%C2H5OH，將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行超聲溶解，完成超聲溶解后，用C2H5OH溶液定容至刻度線，最終得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.1.2供試品溶液的制備準(zhǔn)確稱取2g荔枝草全草，撕碎后放入500mL的圓底燒瓶中，稱取20mL70%C2H5OH溶液加入圓底燒瓶，之后將燒瓶置于水浴鍋上連續(xù)回流提取2次，每次反應(yīng)1.5h，結(jié)束后趁熱濾過(guò)，合并濾液并稀釋，倒入100mL的容量瓶中，用C2H5OH溶液定容至刻度線，即得到樣品待測(cè)液。2.1.3最大吸收波長(zhǎng)的選擇分別準(zhǔn)確地吸取一定量的荔枝草提取液、對(duì)照品溶液和70%C2H5OH溶液，并分別放置于三

4、個(gè)25mL量瓶中，首先在各容量瓶中加入1.0mL的5％NaNO2，混均后靜置6min，再分別滴加入1.0mL10％的Al(NO3)3，上下?lián)u勻后靜置6min，再依次加入10.0mL4%的NaOH溶液，最后用70%C2H5OH溶液定容至容量瓶的刻度線，后放置15min。將配制好的溶液按照紫外可分光光度法進(jìn)行試驗(yàn)，在400～700nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，荔枝草提取液在500nm波長(zhǎng)處存在最大吸收峰，蘆丁溶液在502nm波長(zhǎng)處存在最大吸收峰，空白對(duì)照樣品在此處不存在吸收峰，所以確定最大吸收波長(zhǎng)為500nm（圖A、B、C）。122.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作吸取蘆丁對(duì)照品溶液，第一次吸取1ml

5、，第二次2ml，第三次4ml，依次上升到8ml，將其分別滴入5個(gè)容量瓶中，在此之前先將1.0mL5％的NaNO2滴加入各容量瓶中，混合均勻后靜置6min，然后再在容量瓶中分別滴加入10％的Al(NO3)3各1.0mL，搖晃容量瓶，促使內(nèi)部溶液均勻，然后靜置容量瓶，時(shí)間為6分鐘；加入10.0mL4%的NaOH，加入70%的乙醇溶液定容，達(dá)到容量瓶刻度線，再次搖晃容量瓶，溶液均勻后，靜置15min。同時(shí)制備空白實(shí)驗(yàn)進(jìn)行對(duì)照，在吸收波長(zhǎng)為500nm處測(cè)定吸光度（A），平行測(cè)試取平均值。以蘆丁對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得到回歸方程為A=

6、0.0111c+0.0085(R=0.9991，n=5）。表1-1為測(cè)定的吸光度，圖1-1為繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表1-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)吸光度122.1.5精密度試驗(yàn)對(duì)五份蘆丁對(duì)照品溶液進(jìn)行顯色，記錄5次吸光度，取平均值，RSD=0.4％（<2%），結(jié)果見(jiàn)表1-2。表1-2精密度試驗(yàn)2.1.6穩(wěn)定性試驗(yàn)準(zhǔn)確吸取1mL荔枝草溶液滴加于25mL容量瓶中，按2.1.3項(xiàng)顯色后，存放在室溫下，在0，10，20，30，40，50，60min后，測(cè)定荔枝草溶液吸光度，RSD＝0.62%（<2%）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在60min內(nèi)，荔枝草溶液中總黃酮含量能穩(wěn)定顯色，結(jié)果如表1-3所示。表1-3穩(wěn)定性試驗(yàn)122.1.7

7、重復(fù)性試驗(yàn)稱量6份荔枝草藥材樣品，每份1g，測(cè)定吸光度6次，RSD=0.12%（<2%），表1-4為重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1-4重復(fù)性試驗(yàn)2.1.8加樣回收率試驗(yàn)稱取一定量荔枝草樣品，加入一定量蘆丁對(duì)照品，總共測(cè)定6份樣品，表1-5為加樣回收率結(jié)果。12表1-5加樣回收率試驗(yàn)2.2單因素法優(yōu)選總黃酮提取工藝2.2.1乙醇濃度對(duì)總黃酮含量的影響將提取溫度控制在80℃，料液比為1：10，提取時(shí)間為1.5h，在這一條件下分別稱取5份8g的荔枝