誘變育種流程及紫外誘變育種的詳細(xì)步驟

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1、誘變育種的一般步驟：1.首先是天然菌種的選育：調(diào)查研究及查閱充分的資料↓設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案↓確定采集樣品的生態(tài)環(huán)境采樣↓確定特定的增殖條件增殖培養(yǎng)確定特殊的選擇培養(yǎng)基及可能的定性或半定量快速檢出法平板分離↓原種斜面↓確定發(fā)酵培養(yǎng)基礎(chǔ)條件篩選↓初篩（1株1瓶）↓復(fù)篩（1株3～5瓶）↓結(jié)合初步工藝條件摸索再?gòu)?fù)篩（1株3～5瓶）↓3～5株↓單株純種分離生產(chǎn)性能試驗(yàn)→毒性試驗(yàn)菌種鑒定2.誘變菌種：出發(fā)菌株----菌種純化(出發(fā)菌株性能測(cè)定)----制備斜面孢子----制備單孢子懸液(懸液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù))----誘變劑處理(

2、存活菌數(shù)的測(cè)定并計(jì)算存活率)----平板分離(測(cè)定變異率)----挑取變異菌落并移植至斜面上----初篩(初篩數(shù)據(jù)分析，生產(chǎn)性狀的粗測(cè))----斜面?zhèn)鞔?---復(fù)篩(復(fù)篩數(shù)據(jù)分析，精確測(cè)定生產(chǎn)性狀)----變異菌株(菌株參數(shù)分析)----小型或中型投產(chǎn)試驗(yàn)----大型投產(chǎn)試驗(yàn)。誘變育種應(yīng)把握的主要原則有以下幾點(diǎn)：1)選擇簡(jiǎn)便有效的誘變劑。在選用理化因素作誘變劑時(shí)，在同樣效果下，應(yīng)選用最簡(jiǎn)便的因素；在同樣簡(jiǎn)便的條件下，應(yīng)選用最高效的因素。2)挑選優(yōu)良的出發(fā)菌株。最好采用生產(chǎn)上已發(fā)生自變的菌株，選用對(duì)誘變劑敏感

3、的菌株，選取有利于進(jìn)一步研究或應(yīng)用性狀的菌株。4)處理單細(xì)胞或孢子懸液。單細(xì)胞懸液應(yīng)均勻而分散，孢子、芽孢等應(yīng)稍加萌發(fā)。5)選用合適的誘變劑量。一般正變較多出現(xiàn)在低劑量中，負(fù)變較多地出現(xiàn)在高劑量中。6)選用高效的篩選方法。紫外線誘變育種：紫外線誘變一般采用15W紫外線殺菌燈，波長(zhǎng)為253-265nm．燈與處理物的距離為30cm，照射時(shí)間依菌種而異，一般為幾秒至幾十分鐘。一般我們常以細(xì)胞的死亡率表示，希望照射的劑量死亡率控制在70～80%為宜。被照射的菌懸液細(xì)胞數(shù)，細(xì)菌為106個(gè)/ml左右，霉菌孢子和酵母細(xì)胞

4、為106～107個(gè)/ml。由于紫外線穿透力不強(qiáng)，要求照射液不要太深，約0.5～1.0cm厚，同時(shí)要用電磁攪拌器或手工進(jìn)行攪拌，使照射均勻。由于紫外線照射后有光復(fù)活效應(yīng)，所以照射時(shí)和照射后的處理應(yīng)在紅燈下進(jìn)行。具體操作步驟1．將細(xì)菌培養(yǎng)液以3000r／min離心5min，傾去上清液，將菌體打散加入無(wú)菌生理鹽水再離心洗滌。2．將菌懸液放入一已滅菌的，裝有玻璃珠的三角瓶?jī)?nèi)用手搖動(dòng)，以打散菌體。將菌液倒入有定性濾紙的漏斗內(nèi)過(guò)濾，單細(xì)胞濾液裝入試管內(nèi)，一般處于渾濁態(tài)的細(xì)胞液含細(xì)胞數(shù)可達(dá)108個(gè)／ml左右，作為待處理菌

5、懸液。3．取2～4mL制備的菌液加到直徑9cm培養(yǎng)皿內(nèi)，放入一無(wú)菌磁力攪拌子，然后置磁力攪拌器上、15W紫外線下30cm處。在正式照射前，應(yīng)先開(kāi)紫外線10min，讓紫外燈預(yù)熱，然后開(kāi)啟皿蓋正式在攪拌下照射10～50s。操作均應(yīng)在紅燈下進(jìn)行，或用黑紙包住，避免白熾光。4．取未照射的制備菌液和照射菌液各0.5ml進(jìn)行稀釋分離，計(jì)數(shù)活菌細(xì)胞數(shù)。5．取照射菌液2ml于液體培養(yǎng)基中(300ml三角瓶?jī)?nèi)裝30ml培養(yǎng)液)，120r／min振蕩培養(yǎng)4～6h。6．取中間培養(yǎng)液稀釋分離、培養(yǎng)。7．挑取菌落進(jìn)行篩選。