《電泳儀器操作》PPT課件

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1、電泳儀器操作主要內(nèi)容電泳儀、電泳槽、凝膠成像系統(tǒng)和微波爐的作用，工作原理，操作關(guān)鍵技術(shù)，以及注意事項(xiàng)。電泳原理電泳的定義：帶電粒子在電場(chǎng)的作用下，向著與其電性相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。電泳的基本原理：不同的物質(zhì)在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下，由于所帶電荷不同，因此受到的引力不同，向相反電極泳動(dòng)速度不同進(jìn)而達(dá)到分離目的。電泳技術(shù)：利用帶電粒子在電場(chǎng)中移動(dòng)速度不同而達(dá)到分離的技術(shù)稱為電泳技術(shù)。電泳的作用：主要用于蛋白質(zhì)、核酸、同工酶、氨基酸、多肽等物質(zhì)的分離；還可用于對(duì)分離物質(zhì)的純度和分子量的測(cè)定。電泳的分類根據(jù)電泳分子的大小分為：凝膠電泳：

2、主要用于小蛋白質(zhì)分子和核酸分子的分離毛細(xì)管電泳：主要用于糖類和大蛋白分子的分離根據(jù)電泳方法，大致可分為3類：顯微電泳自由界面電泳區(qū)帶電泳：應(yīng)用最廣泛電泳的分類區(qū)帶電泳按支持物的物理性狀不同，可分為：(1）紙電泳：支持物為濾紙;(2）粉末電泳：如纖維素粉，淀粉，玻璃粉電泳；(3）凝膠電泳：如瓊脂，瓊脂糖，硅膠，淀粉膠，聚丙烯酰胺凝膠電泳；(4）緣線電泳：如尼龍絲，人造絲電泳區(qū)帶按支持物的裝置形式不同，區(qū)帶電泳可分為：(1）水平板電泳：支持物水平放置，是最常用的電泳方式；(2）垂直板電泳：聚丙烯酰胺凝膠可做成垂直板式電泳。(3）柱

3、狀（管狀）電泳：聚丙烯酰胺凝膠可灌入適當(dāng)?shù)碾娪竟苤凶龀晒軤铍娪?。電泳的分類根?jù)蛋白質(zhì)分離的目的分為：?jiǎn)蜗螂娪荆褐辉诰郾０纺z上分離。適于分離種類較少的蛋白。雙向電泳：第一向使用預(yù)制膠條進(jìn)行蛋白質(zhì)的等電聚焦分離，第二向?qū)⒛z條中經(jīng)過第一向分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚丙烯酰胺凝膠上，根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小與第一向相垂直分離。用于蛋白質(zhì)的分離，可將提取的蛋白質(zhì)混合物中數(shù)千種蛋白質(zhì)同時(shí)分離開。單向與雙向電泳條帶比較單向電泳條帶雙向電泳條帶電泳實(shí)驗(yàn)過程水平板電泳：制膠——插試樣格（梳子）——取試樣格——點(diǎn)樣——電泳——染色——凝膠成像（對(duì)電泳

4、結(jié)果進(jìn)行觀察記錄和分析）。垂直板電泳：連續(xù)電泳：直接灌分離膠配制凝膠溶液——灌膠——不連續(xù)電泳：灌分離膠——濃縮膠——插試樣格——取試樣格——點(diǎn)樣——電泳——染色——脫色——成像觀察和記錄。儀器一、電泳儀作用：在電泳中提供電壓與電流。1、電泳儀的分類根據(jù)電泳儀的電壓范圍可將電泳儀分為3類：（1）常壓電泳儀（600V）：用于凈電荷和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳；（2）高壓電泳儀（3000V）：用于載體兩性電解質(zhì)等電聚焦電泳和DNA測(cè)序；（3）超高壓電泳儀（3000～5000V）：用于毛細(xì)管電泳。根據(jù)控制程序分為：?jiǎn)魏悖ê銐海?、雙恒

5、（恒流和恒壓）、三恒（恒流、恒壓、恒功率）。(不論是單恒、雙恒、還是三恒，儀器工作時(shí)任何情況下只能穩(wěn)U、I、P中的一種參數(shù))。毛細(xì)管電泳儀超高壓電泳儀（高效毛細(xì)管電泳儀)常壓電泳儀高壓電泳儀梯度電泳儀(用于土壤微生物的分離）生物分析儀（微流控芯片電泳儀）2、操作方法這里以我們實(shí)驗(yàn)室常用的北京六一儀器廠生產(chǎn)的DYY-12型電腦三恒多用電泳儀為例說明。U、I、P的有效輸入范圍：U：4-1000v（常壓電泳儀）I：4-500mAP：4-300w可以同時(shí)連接4組電泳槽（并聯(lián)），此時(shí)應(yīng)選擇穩(wěn)壓輸出，當(dāng)接多個(gè)電泳槽時(shí)，則儀器顯示的電流數(shù)值

6、為各槽電流之和。電極插座（1）設(shè)置工作程序方法有三種：①用鍵盤輸入新的工作程序，主要使用該方法（見后邊介紹）。②按〔讀取〕鍵，取出保存在0中的上次工作程序，然后按確認(rèn)鍵。（該電泳儀默認(rèn)保存上次程序）③按〔讀取〕、〔0-9〕、〔確定〕鍵，取出保存在(0-9)中的工作程序。取出保存的程序，必須檢查一遍，確認(rèn)無誤后才可啟動(dòng)儀器工作。（2）按鍵操作A、﹝模式﹞鍵用于選擇設(shè)置工作模式。每按一下模式鍵，其工作方式按下列順序改變：STD（標(biāo)準(zhǔn)）TIME(定時(shí))VH(伏時(shí))STEP(分步)標(biāo)準(zhǔn)模式——到時(shí)不關(guān)輸出，只是蜂鳴提示，需人工關(guān)機(jī)；定

7、時(shí)模式——到時(shí)關(guān)輸出；伏時(shí)模式——輸出電壓與工作時(shí)間的乘積達(dá)到設(shè)定值時(shí)關(guān)輸出；分步模式——輸出按步（１-９）及模式（定時(shí)或伏時(shí)）分別設(shè)定及執(zhí)行。通常使用標(biāo)準(zhǔn)模式和定時(shí)模式。B、﹝選擇﹞鍵用于選擇設(shè)置U、I、P、T的參數(shù)設(shè)置時(shí)先看U是否為反顯狀態(tài)，每按一次移到下一個(gè)參數(shù)，移動(dòng)順序?yàn)椋篣=I=P=T=C、﹝清除﹞鍵：可以清除有反顯提示的參數(shù)數(shù)值。如果輸入錯(cuò)誤，可以按﹝清除﹞鍵，再重新輸入。D、﹝啟動(dòng)﹞鍵：確認(rèn)參數(shù)無誤后，啟動(dòng)電泳儀輸出程序。E、﹝+﹞鍵：在輸出情況下遞增反顯U、I、P、T的數(shù)值；每按一次遞增一個(gè)數(shù)字，弱按住不放，則

8、連續(xù)快速遞增。F、﹝-﹞鍵：在輸出情況下遞減反顯U、I、P、T的數(shù)值；每按一次遞減一個(gè)數(shù)字，弱按住不放，則連續(xù)快速遞減。G、﹝繼續(xù)﹞鍵：當(dāng)電泳過程中出現(xiàn)人為中斷停機(jī)，并希望繼續(xù)接著輸出工作，可以按﹝繼續(xù)﹞鍵，此后電泳儀接著前面的工作時(shí)間繼續(xù)工作。工作結(jié)束時(shí)，儀器顯示“End”