魚飼料檢測方法

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1、HPLC檢測飼料中孔雀石綠的方法孔雀石綠（malachitegreen）又稱為苯胺綠、維多利亞綠或中國(China)綠，是一種具有金屬光澤的綠色晶體。孔雀石綠的化學官能團三苯沼氣(CH4)是一種致癌物資，且其易在魚體內(nèi)和情況中殘留，存在致突變、致畸和致癌的危險，故我國、美國(UnitedStates)、加拿大(Canada)以及歐盟等很多國度均制止其在經(jīng)濟魚類（觀賞魚除外）和人類食用魚中應用。魚粉是飼猜中動物卵白的重要起源，含有孔雀石綠及其代謝物的魚粉添加到飼猜中可經(jīng)由進程食品鏈要挾到人類健康。我所現(xiàn)采用

2、NY/T1756-2009標準，應用高效液相色譜法（HPLC）對飼料中孔雀石綠進行測定，本標準適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混合飼料、魚粉中孔雀石綠和無色孔雀石綠含量的測定。液相色譜法孔雀石綠和無色孔雀石綠的定量限均為10μg/kg；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的定量限均為1.0μg/kg?，F(xiàn)將該方法簡要介紹如下：1.原理以乙腈-乙酸鈉緩沖溶液提取樣品中的孔雀石綠和無色孔雀石綠，提取液經(jīng)過二氯甲烷液液萃取，再經(jīng)固相萃取柱凈化，用接有二氧化鉛柱的氰基柱進行高效液相色譜分離，紫外可見光檢測器檢測，外標法定量。2.

3、分析步驟2.1提取稱取飼料樣品約5g(精確到0.001g)，置于100ml離心管中，依次加入1.5ml鹽酸羥胺溶液、2ml對甲苯磺酸溶液、5ml乙酸鈉緩沖溶液和20ml乙腈，加入約2g酸性氧化鋁，振蕩2min，超聲30min，4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中，向離心管中再次加入20ml乙腈，振搖2min，4000r/min離心5min，合并上清液至分液漏斗中。2.2液液萃取加入50ml氯化鈉溶液、50ml二氯甲烷，旋搖，靜置分層。用蒸發(fā)瓶收集下層液體后，在分液漏斗再次加入

4、20ml二氯甲烷，旋搖，靜置分層，收集下層液體于同一蒸發(fā)瓶。將收集液35℃下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(注意：開始時溫度不要直接升35℃，以免爆沸)至近干，加入5ml，乙腈溶解殘渣，備用。2.3凈化2.3.1固相萃取柱的活化按中性氧化鋁柱在上、PRS柱在下的順序?qū)芍?lián)，使用前用5ml乙腈預洗兩柱。2.3.2上樣將2.3.1的樣液緩慢轉(zhuǎn)移到中性氧化鋁柱內(nèi),在抽真空情況下過柱(保持流速1ml／min)。再用5ml乙腈洗滌蒸發(fā)瓶2次，洗滌液均轉(zhuǎn)移至柱內(nèi)，最后用5ml乙腈洗滌小柱。2.3.3洗脫收集棄去中性氧化鋁柱，用乙腈

5、-乙酸鈉緩沖溶液2ml、鹽酸羥胺甲醇溶液lml洗脫，收集洗脫液，過膜(孔徑0.45μm)，上機測定。2.4樣品測定2.4.1色譜條件色譜柱：氰基柱，250mm×4.6mm，柱后氧化鉛柱：35mm×4.6mm。流動相：乙腈＋乙酸鈉緩沖溶液＝60＋40(v＋v)；流速：1.0ml/min。柱溫：室溫。進樣量：50μl。檢測波長：600nm。2.4.2定量測定按高效液相色譜儀說明書調(diào)整儀器操作參數(shù)。向液相色譜儀中注入孔雀石綠和無色孔雀石綠標準工作液及試樣溶液，得到色譜峰面積響應值，用外標法定量。1氯霉素類藥物概

6、述氯霉素類藥物是應用廣泛的廣譜抗生素，常用于動物各種傳染性疾病的治療中，對各類家禽、家畜、水產(chǎn)品及蜂蜜制品各種傳染性疾病的控制和治療起重要作用。氯霉素最初是從委內(nèi)瑞拉鏈絲菌的培養(yǎng)液中提取制得，現(xiàn)在基本使用化學合成法大量生產(chǎn)。其性質(zhì)穩(wěn)定，在干燥狀態(tài)下可保存藥效達2年以上，易溶于有機溶劑，25℃時100ml水中僅溶解25mg。水溶液呈中性，在酸性和中性溶液中較穩(wěn)定，遇堿類易分解失效。其合成品具有左旋光性，也稱左霉素。2氯霉素殘留對人類健康的危害2.1骨髓造血機能紊亂氯霉素對骨髓造血機能有抑制作用，可引起血小板

7、減少性紫癜、粒細胞缺乏癥、再生障礙性貧血、溶血性等，多數(shù)在長期或多次用藥的過程中發(fā)生。2.2對早產(chǎn)兒和新生兒的毒性在早產(chǎn)兒和新生兒肝內(nèi)有些酶系統(tǒng)發(fā)育尚不完全，葡萄糖醛酸結(jié)合的能力較差，因此影響氯霉素在肝中的解毒作用；此外，腎臟排泄能力亦較弱，能招致藥物蓄積中毒。2.3胃腸道癥狀、口部癥狀胃腸道反應主要有腹脹、腹瀉、食欲減退，惡心、嘔吐則少見?？诓堪Y狀如口腔粘膜充血、疼痛、糜爛、口角炎和舌炎等。2.4其它不良反應可引起視神經(jīng)炎、視力障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)性耳聾以及嚴重失眠。有時發(fā)生中毒性精神病，主要表現(xiàn)為

8、幻視、幻聽、定向力喪失、精神失常等。3氯霉素殘留對我國動物產(chǎn)品出口的影響氯霉素殘留問題已引起國際組織和世界上許多國家和地區(qū)的高度重視。歐盟、美國等均在法規(guī)中規(guī)定氯霉素殘留限量標準為“零容許量”，即不得檢出。幾年來，我國出口到歐盟、美國等地區(qū)的水產(chǎn)品、蜂蜜等多次因為氯霉素超標被限制，損失達到數(shù)十億美元。4氯霉素殘留檢測方法近年來各種關(guān)于氯霉素殘留的檢測方法不斷涌現(xiàn)，大致可分為三大類：第一類是生物測定法，第二類是理化分析法，第三類