葉綠素A的測(cè)定

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1、葉綠素A的測(cè)定目錄葉綠素A的測(cè)定原理1葉綠素A的測(cè)定方法2葉綠素A的測(cè)定步驟3葉綠素A的測(cè)定影響4葉綠素A的測(cè)定原理有機(jī)溶劑直接提取浮游生物濃縮樣中的葉綠素，用分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度，根據(jù)葉綠素的特定波長(zhǎng).吸收，用相關(guān)公式計(jì)算其含量。葉綠素主要有葉綠素A和葉綠素B,前者分子式為C55H72O5N4Mg,葉綠素B分子式為C55H70O6N4Mg。葉綠素不屬于芳香族化合物，不溶于水，但溶于有機(jī)溶劑（通常采用丙酮），葉綠素A呈藍(lán)綠色，葉綠素B呈黃綠色，二者同時(shí)被提取出來(lái)。在可見(jiàn)光的范圍，兩者分別在663nm和645nm處波長(zhǎng)有最大吸收。葉綠素A的測(cè)定方法利用分光光度法，將所得的上清

2、液在分光光度計(jì)上，用1cm光程的比色皿，分別讀取在750nm,663nm,645nm,630nm波長(zhǎng)處的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度測(cè)定，對(duì)樣品吸光度進(jìn)行校正。將所測(cè)的對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)的吸光度，代入如下公式計(jì)算：葉綠素A=（1/V*L）*(11.64*（D663-D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630-D750)*V1式中:D為所測(cè)的吸光度V為水樣體積V1為提取液定容后的體積L為比色皿光程葉綠素A的測(cè)定步驟1.采集水樣；必須要具有代表性。2.水樣處理；往水樣中加入1%碳酸鎂懸濁液1ml，以防止酸化引起色素溶解。水樣應(yīng)在低溫弱光的環(huán)境下保存。3樣品濃

3、縮；采用抽濾方式對(duì)水樣進(jìn)行抽濾，在抽濾器中裝好乙酸纖維濾膜，抽完水樣再抽1-2min以減少濾膜上的水分,但抽濾時(shí)絕不能抽至真空。4.濾膜干燥；將濾膜放置于冰箱中干燥3-4h,為樣品提取做準(zhǔn)備。5.濾膜研磨；將干燥好的濾膜置于組織研磨器皿中，加入少量碳酸鎂粉末以及2-3ml的丙酮溶液，充分研磨，提取葉綠素A.6.離心；將研磨液倒入離心試管中進(jìn)行離心，所得上清液倒入10ml的容量瓶中，再往下層加入2-3ml丙酮，再離心，將上清液再轉(zhuǎn)入容量瓶中，接著用丙酮溶液定容至10ml,搖勻。7.測(cè)定；對(duì)提取的上清液用紫外分光光度計(jì)測(cè)量，設(shè)定好測(cè)量的對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)，依次測(cè)定對(duì)應(yīng)的吸光度，即可。8.計(jì)

4、算；通過(guò)上述公式計(jì)算，將已知和所測(cè)值代入公式中，即得到葉綠素A的含量。葉綠素A的測(cè)定影響葉綠素A的測(cè)定影響主要有：1.葉綠素A的降解；光強(qiáng)和溫度對(duì)其含量有較大的影響，樣品最好在低溫和弱光條件進(jìn)行操作。2.研磨的損耗；研磨過(guò)程中會(huì)破壞藻類細(xì)胞的細(xì)胞壁，其程度由研磨和轉(zhuǎn)移而引起的損耗量來(lái)決定。人為誤差太大，那么重復(fù)操作的精密度就會(huì)降低。3.酸化的影響；在抽濾濃縮過(guò)程中，葉綠素A分子的酸化造成的葉綠素A的降解，所以之前在水樣中就要加入碳酸鎂濁液（防止酸化）。4.離心管材料的影響；采用玻璃離心管，因?yàn)楸獣?huì)腐蝕塑料離心管，造成測(cè)定結(jié)果偏高，所以采用玻璃離心管。葉綠素A測(cè)定的改良測(cè)定過(guò)

5、程中需加強(qiáng)質(zhì)控。并要平行取樣，平行分析。測(cè)定葉綠素A時(shí)，樣品應(yīng)該盡快測(cè)定，防止過(guò)長(zhǎng)，葉綠素降解，盡可能在低溫弱光條件下進(jìn)行。控制好提取時(shí)間，使得提取更充分，保證較高的提取效率。這個(gè)實(shí)驗(yàn)叫做葉綠素A的測(cè)定方法探討，實(shí)驗(yàn)誤差較大，最佳的方法還在不斷地深入研究中，有興趣的同學(xué)可以查閱相關(guān)資料，開(kāi)動(dòng)大腦馬達(dá)，提出自己的見(jiàn)解。感謝您的觀看祝你暑假愉快