資源描述：
《葉綠素a與葉綠素b含量的測定.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、葉綠素a與葉綠素b含量的測定實驗?zāi)康暮鸵饬x葉綠素a與葉綠素b是高等植物葉綠體色素的重要組分，約占到葉綠體色素總量的75%左右。葉綠素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光能的作用(少量的葉綠素a還具有光能轉(zhuǎn)換的作用)，因此葉綠素的含量與植物的光合速率密切相關(guān)，在一定范圍內(nèi)，光合速率隨葉綠素含量的增加而升高。另外，葉綠素的含量是植物生長狀態(tài)的一個反映，一些環(huán)境因素如干旱、鹽漬、低溫、大氣污染、元素缺乏都可以影響葉綠素的含量與組成，并因之影響植物的光合速率。因此葉綠素含量a與葉綠素b含量的測定對植物的光合生理與逆境生理具有重要意義。實驗原理葉綠素提取液
2、中同時含有葉綠素a和葉綠素b，二者的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離葉綠素a和葉綠素b的情況下同時測定葉綠素a和葉綠素b的濃度，可分別測定在663nm和645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區(qū)的吸收峰）的光吸收，然后根據(jù)Lambert-Beer定律，計算出提取液中葉綠素a和葉綠素b的濃度。A663=82.04Ca+9.27Cb ?。?）A645=16.75Ca+45.60Cb?。?）公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃度（單位為g/L），82.04和9.27 分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù)（濃度
3、為1g/L，光路寬度為1cm時的吸光度值）；16.75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù)。即混合液在某一波長下的光吸收等于各組分在此波長下的光吸收之和。將上式整理，可以得到下式：Ca=0.0127A663-0.00269A645（3）Cb=0.0229A645-0.00468A663（4）將葉綠素的濃度改為mg/L，則上式變?yōu)椋篊a=12.7A663-2.69A645（5）Cb=22.9A645-4.68A663（6）CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645（7）CT為葉綠素的總濃度實驗儀器及材料實驗
4、材料：菠菜或其它綠色植物實驗儀器及試劑：UV-1700分光光度計；天平；剪刀；打孔器；研缽；移液管；漏斗；量筒；培養(yǎng)皿；濾紙；丙酮；石英砂；CaCO3；實驗步驟提取葉綠素選取有代表性的菠菜葉片數(shù)張，于天平上稱取0.5g，（也可用打孔器打取一定數(shù)量的葉圓片，計算總的葉面積），剪碎后置于研體中，加入5ml80%丙酮，少許CaCO3和石英砂。仔細研磨成勻漿，用濾斗過濾到10ml量筒中，注意在研缽中加入少量80%丙酮將研缽洗凈，一并轉(zhuǎn)入研缽中過濾到量筒內(nèi)，并定容至10ml。將量筒內(nèi)的提取液混勻，用移液管小心抽取5ml轉(zhuǎn)入25ml量筒中，再加入80%丙
5、酮定容至25ml（最終植物材料與提取液的比例為W：V＝0.5：50＝1：100，葉色深的植物材料比例要稀釋到1：200）。測量光吸收利用722分光光度計或UV1700分光光度計，分別測定葉綠素提取液在645nm和663nm下的吸光度。結(jié)果分析將測得的數(shù)值代入到公式（5）（6）（7）中，計算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的濃度。最后要計算出單位葉片鮮重中葉綠素的含量：葉綠素a含量(mg/g鮮重)＝Ca×50ml（總體積數(shù)）×1ml/1000ml/L÷0.5g=0.1Ca葉綠素b含量(mg/g鮮重)＝0.1Cb總?cè)~綠素含量(mg/g鮮重)＝0.1
6、CT討論：1．?葉綠素在蘭光區(qū)的吸收峰高于紅光區(qū)的吸收峰，為何不用蘭光區(qū)的光吸收來測定葉綠素的含量。2．?計算葉綠素a與葉綠素b含量的比值，可以得到什么結(jié)論？3．?比較陽生植物和陰生植物的葉綠素a和葉綠素b的含量以及比例，可以得到什么結(jié)論？
