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《豆梨銨轉(zhuǎn)運蛋白基因PcAMT1-1和PcAMT1-2的克隆與功能鑒定-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、園藝學報2013，40(11)：2115—2126http：／／Ⅵahs．a(chǎn)c．caActarticulturaeSinicaE—mail：yuanyixuebao@126．tom豆梨銨轉(zhuǎn)運蛋白基因PcAMT1．1和盯．2的克隆與功能鑒定叢郁，楊順瑛，金曼，郝東利，蘇彥華(中國科學院南京土壤研究所土壤與農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展國家重點實驗室，南京210008)摘要：為探明豆梨(eyruscalleryanaDcne．)銨轉(zhuǎn)運蛋白基因家族成員的序列特征、生理功能和表達特點，以豆梨幼苗為材料，運用電子克隆與3'-RACE技術(shù)獲得2個
2、銨轉(zhuǎn)運蛋白基因PcAMT1．J和PcAMT1．2，采用酵母互補和半定量RT-PCR方法研究它們的生理功能與表達特點。結(jié)果表明：PcAMT1．和PcAMT1．2開放閱讀框為1518bp和1515bD，編碼的蛋白分別含505和504個氨基酸殘基。PcAMT1．1和PcAMT1—2分別與甜橙×枳后代CpAMT(ABI52423)和茶CsAMT1：2(AB114913)的同源性最高(81．96％和78．31％)。PcAMT1．J和PcAMT1．2轉(zhuǎn)入酵母均能使銨轉(zhuǎn)運體缺失突變菌株31019b恢復(fù)NH4吸收能力，在酸性條件下(p
3、H4．8或5．8)P，．J和PcAMT1．2對31019b的互補效果均優(yōu)于中性條件(pH6．8)。NHa有毒類似物MeA+可以顯著抑制轉(zhuǎn)PcAMT1．酵母31019b的生長，該物質(zhì)對轉(zhuǎn)PcAMT1—2酵母31019b無抑制效果；谷氨酰胺合成酶抑制劑MSX可有效抑制PcAMT1．2對酵母31019b的互補效果，對PcAMT1．J的互補效果無顯著影響。正常供銨，PcAMT1一J主要在葉中表達，PcAMT1—2主要在根中表達；無氮處理后，PcAMT1．和PcAMT1．2在根中的表達先上調(diào)后下降；重新供銨后，它們的表達量恢復(fù)；
4、地上部的表達對上述處理無顯著響應(yīng)。綜上所述，PcAMT1．和PcAMT1．2在豆梨中具有吸收或轉(zhuǎn)運NHa的功能，并可能具備不同的調(diào)控機制。關(guān)鍵詞：豆梨；銨轉(zhuǎn)運蛋白基因；克??；表達特點；功能互補中圖分類號：S661．2文獻標志碼：A文章編號：0513—353X(2013)11-2115．12MolecularCloningandFunctionAnalysesofTwoAmmoniumTransporterProteinGenesfromPyruscalleryanaCONGYu，YANGShun—ying，JINMan
5、，HAODong—li，andSUYan—hua(StateKeyLaboratoryofSoilandSustainableAgriculture，InstituteofSoilScience，ChineseAcademyofSciences，Nanjing210008，China)Abstract：Theobjectiveofthisstudywastoilluminatesequencefeature，physiologicalfunctionandexpressioncharacteristicofPcAMT1
6、一andPcAMT1—2fromammoniumtransportproteingenefamilyinbeanpear(pyruscalleryanaDcne．)．ThecDNAsequencesofPcAMT1一』andPcAMT1—2wereclonedfrombeanpearseedlingsbyESTsplicingandrapidamplificationofcDNAends(RACE)methods．TheyeastcomplementationwasadaptedtopreliminarystudyPc
7、AMT1一，andPcAMT1—2physiologicalfunctions．收稿日期：2013—04—10；修回日期：2013—09—16基金項目：國家自然科學基金重點項目(91125028)；中國博士后基金項目(20090461150)‘通信作者Au~orforcorrespondence(E-mail：yhsu@issas．a(chǎn)c．cn；Tel：025-86881529)2116園藝學報40卷Furthermore，theirexpressionpatternswereanalyzedbysemi—quantit
8、ativeRT-PCRunderdiferentammoniumconcentrations．TheresultsshowedthatPcAMT1一，cDNAhadanopenreadingframeof1518nucleotidesencodingapolypeptidewith505residues，whilePcAMT1—2
