豆梨磷轉運蛋白質基因( PcPht1) 的克隆、表達及啟動子分析-論文.pdf

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1、江蘇農業(yè)學報(JiangsuofAgr.Sci.),2013,29(4):842~850842李慧,叢郁,常有宏,等.豆梨磷轉運蛋白質基因(PcPht1)的克隆、表達及啟動子分析[J].江蘇農業(yè)學報,2013,29(4)842.850.doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2013.04.027豆梨磷轉運蛋白質基因(PcPht1)的克隆、表達及啟動子分析李慧,叢郁,常有宏,藺經,盛寶龍(1.江蘇省農業(yè)科學院園藝研究所,江蘇南京210014;2.國家農業(yè)科技華東(江蘇)創(chuàng)新中心——高效園藝作物遺傳改良實驗室,江蘇南京210014;3.中國科學院南京土壤研究所土壤與農業(yè)可持續(xù)

2、發(fā)展國家重點實驗室,江蘇南京210008)摘要:為明確梨砧木豆梨(calleryanaDcne.)磷轉運蛋白質基因的序列特點和表達模式,采用同源克隆、RACE技術和染色體步移法克隆獲得1個Pht基因』的eDNA、DNA及啟動子序列,并利用RT.PCR檢測在不同供磷水平下該基因在豆梨幼苗中的表達情況。結果表明』cDNA序列編碼區(qū)長1617bp,編碼1個由538個氨基酸組成的蛋白質,其相對分子質量為5.908x10。該基因編碼區(qū)DNA序列沒有內含子,其啟動子除了具有_rATA/cAAT—box外還包含防御與脅迫響應元件、光響應元件和茉莉酸甲酯響應順式作用元件。Pc£所編碼蛋白質由12個疏水的跨膜

3、區(qū)域組成,包括H2PO一/nH共運體、糖轉運體和MFS通用底物轉運體3個Phtl蛋白質特征結構域。PePhtl與大豆GmPhtl;7和橡膠HbPhtl間有較高的一致性(分別為88.0%和87.0%);與擬南芥Phtl蛋白質家族處于系統(tǒng)進化樹的同一分支,并與AtPhtl;4和AtPhtl;7的親緣關系最近。正常供磷條件下,P£基因主要在根中表達,低磷時該基因的表達上調,提高供磷濃度其表達受到抑制,說明Pc£J的表達受環(huán)境磷濃度調控。關鍵詞:豆梨;磷轉運蛋白質基因;分離;啟動子;表達中圖分類號:$661.2文獻標識碼:A文章編號:1000A.A.A.0(2013)04-0842-09Clonin

4、g,expressionandpromoteranalysisofaphosphatetransporterproteingenePcPhtlfromPyruscalleryanaDcne.LIHui,CONGYu,CHANGYou.hong,LINJing,SHENGBao.1ong(1.InstituteofHorticulture,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences,Nanjing210014,China;2.EfficientHorticultureCropGeneticImprovementLabo—ratory,NationalAgricul

5、turalScienceandTechnologyJiangsuInnovativeCenter,Naujing210014,China;3.StateKeyLaboratoryofSoilandSustainableAgriculture,InstituteofSoilScience,ChineseAcademyofSciences,Nanjing210008,China)Abstract:Thisexperimentwasconductedtoinvestigatethesequencecharacteristicsandexpressionpatternofphos—phatetran

6、sporterprotein(Pht)geneinbeanpear(rcalleryanaDcne.).ThecDNA,DNAandpromotersequencesofaP£Jgenewereisolatedfrombeanpearusinghomologouscloning,rapidamplificationofcDNAends(RACE)andge—nomewalkingmethod.Atthesametime,itsexpressioninbeanpearseedlingsatdifferentphosphatelevelswasanalyzedbysemi—quantitativ

7、ereversetranscriptionpolymerasechainreaction.PcPhl1cDNAcodingregionlengthisl617bp.收稿日期:2013-01—24whichcontainsanopenreadingflameencodinga5.908x基金項目:國家自然科學基金項目(31101529);江蘇省農業(yè)科技自10proteinconsistingof538amino

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