木薯胚性愈傷組織離體保存條件的篩選.pdf

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1、ChinaTropicalAgriculture生保佳木薯胚性愈傷組織離體保存條件的篩選一愈一芽側枝一薯驗試一以一在存一度溫同一糖濃及不以黎一～表結選篩條制℃果保性萍凇細～私州一度一聃缸一愈中生一性胚至長一。一著砌刖呸一．(廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所廣西南寧530001)傷對條長織性下獅況打木薯(Cassava)是大戟科(Euphorbiaceae)木薯1-2方法屬(Manihot)的灌木狀植物，是世界三大薯類作物之1．2．1不同保存條件處理一【”，廣泛栽培于熱帶和亞熱帶地區(qū)，其栽培及加工利本試驗

2、采用由品種GR3腋芽誘導出的顆粒狀胚性愈用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要的地位。目前世界各木薯生產(chǎn)傷在常規(guī)固體保存培養(yǎng)基(GD培養(yǎng)基+Picloraml2mg／L國收集保存的木薯種質已有8500多份[2】。為充分發(fā)揮資+蔗糖25g／L+脂瓊6．5g／L)上添~1]2mg／L、6mg／L、源優(yōu)勢，發(fā)展我國木薯產(chǎn)業(yè)，對木薯種質資源進行研究10mg／L不同濃度的生長抑制劑比久(B9)和烯效唑和保存具有十分重要的意義。最近幾十年中，以植物組($3307)；在GD+Picloraml2mg／L+脂瓊6．5g／L固體培織培

3、養(yǎng)技術為基礎的緩慢生長離體保存技術也得到了迅養(yǎng)基中分別附加10g／L、30L、50g／L的蔗糖；以正常接速發(fā)展，目前已成功地應用于多種植物種質資源的離體種后材料在不同溫度0℃、10oC、15℃、20oC、26℃條保存【。本試驗通過在培養(yǎng)基上添加生長抑制劑對木薯件下保存。上述處理每培養(yǎng)皿接人愈傷組織0．5g，均放胚性愈傷組織進行離體保存，測定不同天數(shù)保存愈傷組置在20℃培養(yǎng)，光照度1500～2000Lx，光照時間12h／d，織的細胞活力及形態(tài)指標，旨在篩選出木薯種質資源短在溫室下生長50d后，統(tǒng)計愈傷量

4、、愈傷質地、顏色及期保存的適宜方法，為木薯種質資源的長期離體保存提生長情況。供參考依據(jù)。1．2_2胚性愈傷組織保存條件的篩選方法綜合上述試驗得出的結果，對常規(guī)保存培養(yǎng)基進1材料和方法行適宜調整，選用愈傷質地及生長情況表現(xiàn)較好的1．1供試材料愈傷組織分別添加到抑制劑比久(B9)和烯效唑濃試驗所用組培材料來源于廣西亞熱帶作物研究所度均為6mg／L、蔗糖30g／L常規(guī)保存固體培養(yǎng)基『為對照培育的木薯品種GR3，利用木薯嫩枝側芽而誘導出來(CK)忡，置于25℃，光照度1500～2000Lx，光照時并經(jīng)不同培養(yǎng)

5、基以及不同天數(shù)保存的胚性愈傷組織作間12h／d，培養(yǎng)7d后，轉人20℃下，光照強度和時間不為測定材料。試驗所采用的緩沖液體系均是以0．2mol／L變。每20d、40d、60d、80d、100d觀察一次，測定處理NaH，PO4-Na，HPO磷酸鹽溶液為母液配制而成。組與對照組胚性愈傷組織生長量及細胞活力?；痦椖浚簭V西自然科學基金資助項目(2012GXNSFAA053072)。作者簡介：黎萍(1966__)，女，大學本科，農(nóng)藝師。E-mail~fipinggx1026@163．com。5314蕊蕾矗n蛐

6、由置熱莆IHJChinaTropicalAgriculture1．2．3細胞活力測定方法值。并以OD值為縱坐標，以1TrF的含量數(shù)為橫坐標，繪木薯胚性愈傷細胞活力TTC法測定方法參照白寶制出以甲醇為溶劑的標準曲線(見圖1)。璋【4】的方法，略有改動。1．2．5甲醇浸泡法1．2．4標準曲線制作把胚性愈傷取出，用循環(huán)水真空泵濾干水分，再用取0．4％TTC溶液0．25mL，加乙酸乙酯9．75mL和少量濾紙壓干愈傷組織水分，放入試管中，加人5mL甲醇溶保險粉于lOmL容量瓶中，充分搖動，所生成的紅色TTF液，

7、然后將試管置于35℃保溫箱3h，使愈傷組織完全變溶液作為已知母液。取5只lOmL容量瓶，按照表1所給白。將紅色提取液移入容量瓶，最后加入甲醇使總量數(shù)據(jù)配制系列濃度溶液，并用甲醇定容。用紫外分光光為lOmL，用分光光度計在波長485nm下比色，以空白度計比色，以甲醇作空白對照，波長485nm，記錄OD為對照試驗作參比測出吸光度，查標準曲線，求出TTC還原量。1．2．6保存效果的評價方法表1TTF系列濃度溶液的配制用外觀、生長量及細胞活力等指標評價胚性愈傷組織的保存效果。在外觀上主要觀察愈傷組織的顏色，生

8、活力強的胚性愈傷組織為鮮明的淡黃色，在衰母液O．250．501．001．502．00甲醇9．759．509．008．508．00老過程中胚性愈傷組織逐漸變?yōu)楹稚?；生長量的測定采用稱重法；細胞活力的測定采用氯化三苯基四氮唑(TTC)法is】。趔0．7002結果與分析000．6002．1不同保存條件對木薯胚性愈傷組織的形態(tài)指標0．500影響0．400在培養(yǎng)基中添加蔗糖是一種常用的緩慢生長保存0．300手段，通過提高培養(yǎng)基的滲透勢負值，造成水分逆境，0．200