木薯胚性愈傷組織離體保存條件的篩選.pdf

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1、ChinaTropicalAgriculture生保佳木薯胚性愈傷組織離體保存條件的篩選一愈一芽側(cè)枝一薯驗(yàn)試一以一在存一度溫同一糖濃及不以黎一～表結(jié)選篩條制℃果保性萍凇細(xì)～私州一度一聃缸一愈中生一性胚至長一。一著砌刖呸一．(廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所廣西南寧530001)傷對(duì)條長織性下獅況打木薯(Cassava)是大戟科(Euphorbiaceae)木薯1-2方法屬(Manihot)的灌木狀植物，是世界三大薯類作物之1．2．1不同保存條件處理一【”，廣泛栽培于熱帶和亞熱帶地區(qū)，其栽培及加工利本試驗(yàn)

2、采用由品種GR3腋芽誘導(dǎo)出的顆粒狀胚性愈用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要的地位。目前世界各木薯生產(chǎn)傷在常規(guī)固體保存培養(yǎng)基(GD培養(yǎng)基+Picloraml2mg／L國收集保存的木薯種質(zhì)已有8500多份[2】。為充分發(fā)揮資+蔗糖25g／L+脂瓊6．5g／L)上添~1]2mg／L、6mg／L、源優(yōu)勢(shì)，發(fā)展我國木薯產(chǎn)業(yè)，對(duì)木薯種質(zhì)資源進(jìn)行研究10mg／L不同濃度的生長抑制劑比久(B9)和烯效唑和保存具有十分重要的意義。最近幾十年中，以植物組($3307)；在GD+Picloraml2mg／L+脂瓊6．5g／L固體培織培

3、養(yǎng)技術(shù)為基礎(chǔ)的緩慢生長離體保存技術(shù)也得到了迅養(yǎng)基中分別附加10g／L、30L、50g／L的蔗糖；以正常接速發(fā)展，目前已成功地應(yīng)用于多種植物種質(zhì)資源的離體種后材料在不同溫度0℃、10oC、15℃、20oC、26℃條保存【。本試驗(yàn)通過在培養(yǎng)基上添加生長抑制劑對(duì)木薯件下保存。上述處理每培養(yǎng)皿接人愈傷組織0．5g，均放胚性愈傷組織進(jìn)行離體保存，測(cè)定不同天數(shù)保存愈傷組置在20℃培養(yǎng)，光照度1500～2000Lx，光照時(shí)間12h／d，織的細(xì)胞活力及形態(tài)指標(biāo)，旨在篩選出木薯種質(zhì)資源短在溫室下生長50d后，統(tǒng)計(jì)愈傷量

4、、愈傷質(zhì)地、顏色及期保存的適宜方法，為木薯種質(zhì)資源的長期離體保存提生長情況。供參考依據(jù)。1．2_2胚性愈傷組織保存條件的篩選方法綜合上述試驗(yàn)得出的結(jié)果，對(duì)常規(guī)保存培養(yǎng)基進(jìn)1材料和方法行適宜調(diào)整，選用愈傷質(zhì)地及生長情況表現(xiàn)較好的1．1供試材料愈傷組織分別添加到抑制劑比久(B9)和烯效唑濃試驗(yàn)所用組培材料來源于廣西亞熱帶作物研究所度均為6mg／L、蔗糖30g／L常規(guī)保存固體培養(yǎng)基『為對(duì)照培育的木薯品種GR3，利用木薯嫩枝側(cè)芽而誘導(dǎo)出來(CK)忡，置于25℃，光照度1500～2000Lx，光照時(shí)并經(jīng)不同培養(yǎng)

5、基以及不同天數(shù)保存的胚性愈傷組織作間12h／d，培養(yǎng)7d后，轉(zhuǎn)人20℃下，光照強(qiáng)度和時(shí)間不為測(cè)定材料。試驗(yàn)所采用的緩沖液體系均是以0．2mol／L變。每20d、40d、60d、80d、100d觀察一次，測(cè)定處理NaH，PO4-Na，HPO磷酸鹽溶液為母液配制而成。組與對(duì)照組胚性愈傷組織生長量及細(xì)胞活力?；痦?xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2012GXNSFAA053072)。作者簡(jiǎn)介：黎萍(1966__)，女，大學(xué)本科，農(nóng)藝師。E-mail~fipinggx1026@163．com。5314蕊蕾矗n蛐

6、由置熱莆IHJChinaTropicalAgriculture1．2．3細(xì)胞活力測(cè)定方法值。并以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以1TrF的含量數(shù)為橫坐標(biāo)，繪木薯胚性愈傷細(xì)胞活力TTC法測(cè)定方法參照白寶制出以甲醇為溶劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1)。璋【4】的方法，略有改動(dòng)。1．2．5甲醇浸泡法1．2．4標(biāo)準(zhǔn)曲線制作把胚性愈傷取出，用循環(huán)水真空泵濾干水分，再用取0．4％TTC溶液0．25mL，加乙酸乙酯9．75mL和少量濾紙壓干愈傷組織水分，放入試管中，加人5mL甲醇溶保險(xiǎn)粉于lOmL容量瓶中，充分搖動(dòng)，所生成的紅色TTF液，

7、然后將試管置于35℃保溫箱3h，使愈傷組織完全變?nèi)芤鹤鳛橐阎敢骸Ｈ?只lOmL容量瓶，按照表1所給白。將紅色提取液移入容量瓶，最后加入甲醇使總量數(shù)據(jù)配制系列濃度溶液，并用甲醇定容。用紫外分光光為lOmL，用分光光度計(jì)在波長485nm下比色，以空白度計(jì)比色，以甲醇作空白對(duì)照，波長485nm，記錄OD為對(duì)照試驗(yàn)作參比測(cè)出吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出TTC還原量。1．2．6保存效果的評(píng)價(jià)方法表1TTF系列濃度溶液的配制用外觀、生長量及細(xì)胞活力等指標(biāo)評(píng)價(jià)胚性愈傷組織的保存效果。在外觀上主要觀察愈傷組織的顏色，生

8、活力強(qiáng)的胚性愈傷組織為鮮明的淡黃色，在衰母液O．250．501．001．502．00甲醇9．759．509．008．508．00老過程中胚性愈傷組織逐漸變?yōu)楹稚?；生長量的測(cè)定采用稱重法；細(xì)胞活力的測(cè)定采用氯化三苯基四氮唑(TTC)法is】。趔0．7002結(jié)果與分析000．6002．1不同保存條件對(duì)木薯胚性愈傷組織的形態(tài)指標(biāo)0．500影響0．400在培養(yǎng)基中添加蔗糖是一種常用的緩慢生長保存0．300手段，通過提高培養(yǎng)基的滲透勢(shì)負(fù)值，造成水分逆境，0．200