牛磺膽酸對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Gsα基因表達(dá)的影響.pdf

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1、·10·生物技術(shù)中國(guó)畜牧獸醫(yī)2013年第4O卷第4期?；悄懰釋?duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Gstt基因表達(dá)的影響郭文瑞，毛偉。，關(guān)紅，李培鋒。(1．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010018；2．農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古呼和浩特010018)摘要：本試驗(yàn)旨在探討?；悄懰?taurocholateacid，TCA)對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞刺激性G蛋白a(Gsa)基因表達(dá)的影響，為闡明TCA對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的作用機(jī)制提供線索。采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)TCA對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞GsamRNA表達(dá)的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示，高(15ptg／mI)、中(1．5／lg／mI)和低劑量(0

2、．15／~g／mL)的TCA作用組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞GsdmRNA的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組和I．PS刺激組(P

3、，使第二信使物質(zhì)1．1．1試驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)純系昆明種小白鼠(體重增多或減少，進(jìn)而改變膜上的離子通道，激活多種效為18～22g)由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供應(yīng)系統(tǒng)，從而介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。G蛋白即異源三聚體(許可證號(hào)為SCXK(蒙2002—0001))。鳥苷酸結(jié)合蛋白，又稱GTP結(jié)合蛋白。免疫或炎癥1．1．2藥品與試劑?；蛆Z去氧膽酸(TCDCA)(純度為98)由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院獸醫(yī)藥中細(xì)胞釋放或由體液產(chǎn)生的多種介質(zhì)(如前列腺素、理學(xué)與毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室從雞膽汁中提取；RPMI一1640嘌呤核苷、組胺等)都通過(guò)GPCR傳遞信號(hào)。不同的培養(yǎng)基(批號(hào)：31800—014)購(gòu)于GIBCO公司；R

4、NA免疫或炎癥細(xì)胞上都有各自的GPCR表達(dá)及其相應(yīng)PCRKit(AMV)Ver．3．0(批號(hào)：DRR019A)、的G蛋白形成的信號(hào)傳導(dǎo)體系(陳華青等，2009)。RNAisoTMPlus(批號(hào)：D9108B)等均購(gòu)于寶生物工牛磺膽酸(taurocholateacid，TCA)具有抗炎、程(大連)有限公司。利膽、鎮(zhèn)咳、祛痰、抑菌等多方面的生物活性和作用，1．2方法是動(dòng)物膽汁的主要有效成分之一(梅和珊等，1999a，1．2．1小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)按照王彩1999b；李沙等，1999)。薛原等(2004)和劉欣媛等云(2008)介紹的方法分離培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。(2010)研究結(jié)

5、果顯示，TCA對(duì)急性、亞急性和慢性1．2．2TCA對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞GsamRNA表增生性炎癥均有顯著地抑制作用，同時(shí)對(duì)動(dòng)物機(jī)體達(dá)的影響單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能和細(xì)胞免疫具有抑制作1．2．2．1引物設(shè)計(jì)根據(jù)GenBank中小鼠Gsa用，而對(duì)特異性體液免疫具有增強(qiáng)作用，但作用機(jī)制(NM_010309．3)和~-actin的序列(NM_007393．3)，采尚不清楚。本研究以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)用PrimerPremier5．0軟件分別設(shè)計(jì)l對(duì)引物，引物象，觀察TCA對(duì)該細(xì)胞刺激性G蛋白a(stimulato—均由上海生工生物工程有限公司合成。Gsa上游引ryGTP—bindingp

6、rotein，Gsa)mRNA表達(dá)的影物：5TCCAGAGTTCGCTCGCTACACCA一3；下響，旨在闡明TCA對(duì)免疫細(xì)胞功能的調(diào)控作用，并游引物：5-CGCAGGTAAAGTGAGGGTAGCAG—揭示其在抗炎和免疫調(diào)控過(guò)程中的分子機(jī)制，可為TA一3，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為161bp。t3-actin上游引物：5一CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC一3；下收稿日期：2012—09—13游引物：5r_ATGGAGCCACCGATCCACA一3，擴(kuò)增作者簡(jiǎn)介：郭文瑞(1976一)，男，內(nèi)蒙古人，博士生，講師，研究方產(chǎn)物大小為125bp。向：獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)。1．2．2．

7、2總RNA的提取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞于通信作者：李培鋒(1955)，男，內(nèi)蒙古人，博士生導(dǎo)師，研究方向：獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)。培養(yǎng)箱培養(yǎng)貼壁4h后棄上清，分高、中和低劑量組基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(31160518)。3組，分別加入濃度為15、1．5和0．15／~g／mL的·12·生物技術(shù)中國(guó)畜牧獸醫(yī)2013年第4O卷第4期2．3熒光定量PCR檢測(cè)TCA對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)LPS刺激組相比，TCA可極顯著提高小鼠腹腔巨噬胞GSC~InRNA表達(dá)的影響由圖7可知，與LPS細(xì)胞內(nèi)