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1、食管鱗癌組織中g(shù)alectin3及MMP2表達(dá)意義作者：石菲，彭貴勇，孫永剛，姚大鵬【摘要】目的：研究galectin3在食管癌組織中的表達(dá)及其與基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2的表達(dá)間的關(guān)系.方法：用免疫組化SP法分別檢測(cè)galectin3和MMP2在80例食管癌和22例正常食管組織中的表達(dá)情況.并對(duì)腫瘤病理分級(jí)、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.結(jié)果：食管癌組織中Galectin3蛋白表達(dá)率為77.5%,顯著高于正常食管組織（27.3%,P<；0.05）.Galectin3高表達(dá)與食管癌的病理分級(jí)、浸潤(rùn)
2、及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān).Galectin3與MMP2表達(dá)呈正相關(guān)（P<；0.05）.結(jié)論：Galectin3在食管癌中表達(dá)增強(qiáng),它的高表達(dá)對(duì)判斷食管癌的惡性程度、浸潤(rùn)甚至轉(zhuǎn)移有重要價(jià)值.MMP2的高表達(dá)使Galectin3上調(diào).【關(guān)鍵詞】食管腫瘤；半乳糖凝集素3；明膠酶A；免疫組織化學(xué)0引言Galectins（B半乳糖昔結(jié)合蛋白）是生物體內(nèi)廣泛存在的一大類結(jié)合蛋白，屬于凝集素家族.Galectin3是該家族的重要成員之一，它廣泛表達(dá)于上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞，存在于細(xì)胞質(zhì)及胞核內(nèi)，參與多種生物學(xué)過(guò)程，如：調(diào)節(jié)細(xì)胞一
3、細(xì)胞、細(xì)胞一基質(zhì)間的相互作用，參與細(xì)胞的增殖、分化、局部免疫調(diào)節(jié)和凋亡等，與腫瘤的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)、生長(zhǎng)和黏附密切相關(guān).目前，galectin3對(duì)惡性腫瘤演進(jìn)的影響作用在前列腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸癌、胃癌和乳腺癌中已有研究，而它與食管鱗癌的關(guān)系鮮有報(bào)道.我們探討galectin3蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)情況以及其與MMP2的關(guān)系.1材料和方法1.1材料第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院200609/200705手術(shù)病理科證實(shí)為食管鱗癌標(biāo)本80例，術(shù)前未行放化療；男47例，女33例.年齡27~80（平均46.6）歲.病理I級(jí)30例，
4、II級(jí)32例，III級(jí)18例；有、無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別為34和46例.取距病變組織5cm以上的食管正常組織22例作正常對(duì)照組.采取新鮮標(biāo)本后，即置于40g/L甲醛液固定過(guò)夜，次日取材、脫水、包埋.石蠟連續(xù)切片，片厚4um,行常規(guī)HE染色.即用型鼠抗人galectin3mAb為福州邁新生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；即用型兔多抗MMP2,SP試劑盒、DAB顯色試劑均由北京中杉公司提供.1.2方法免疫組織化學(xué)采用SP法，以間變型大細(xì)胞淋巴瘤作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性空白對(duì)照.石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，用30inL/L
5、H202室溫下孵育30min（以封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶），PBS漂洗5minX3次.將切片置于pH6.0的枸椽酸鹽緩沖液中，微波爐加熱修復(fù)抗原20min（溫度控制在95?100°C）.取出自然冷卻至室溫后，用PBS漂洗5minX3次.滴加100mL/L山羊血清室溫下孵育30min.傾去血清，滴加一抗，置于濕盒內(nèi)，0C冰箱過(guò)夜.同法沖洗切片，滴加生物素化二抗工作液，置于濕盒中，37°C孵育25min,同法沖洗切片，滴加鏈酶親和素過(guò)氧化物酶復(fù)合體（三抗），37°C孵育25min,再?zèng)_洗切片.滴加DAB顯色劑，鏡下
6、觀察控制反應(yīng)時(shí)間，蒸餡水洗中止，切片蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化返藍(lán)，脫水封片.galectin3和MMP2均以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性染色細(xì)胞，采用陽(yáng)性染色強(qiáng)度結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行判斷.在400倍視野下每張切片隨機(jī)觀察4個(gè)視野，將切片中平均陽(yáng)性細(xì)胞比例及染色深淺分別計(jì)0?3分，切片中無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，0分；陽(yáng)性細(xì)胞V25%,1分；26%?50%,2分；51%?75%,3分；>；75%,4分.染色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞為準(zhǔn)：無(wú)著色，0分；淡黃色，1分；黃或深黃色，2分；褐或棕褐色，3分.再按這兩項(xiàng)指標(biāo)的積
7、分相加將結(jié)果分為4級(jí)：0分為””；C2分為“+”；3?4分為"”；5?6分為“"?其中“"“"為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá).統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：運(yùn)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，率的比較采用X2檢驗(yàn)，galectin3表達(dá)與MMP2表達(dá)間的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān).2結(jié)果2.1食管鱗癌組織中g(shù)alectin3的分布Galectin3陽(yáng)性信號(hào)呈棕黃色顆粒狀或線網(wǎng)狀染色，大多數(shù)病例定位于細(xì)胞質(zhì)(圖1A),少數(shù)位于間質(zhì).Galectin3蛋白在腫瘤組織中呈異質(zhì)性表達(dá)，即在腫瘤的不同區(qū)域表現(xiàn)出不同的特點(diǎn)，或彌散分布，或呈小片狀
8、、灶狀分布，染色強(qiáng)度亦不一致.食管癌組織中g(shù)alectin3陽(yáng)性表達(dá)率77.5%(62/80),正常食管黏膜組織中g(shù)alectin372.7%(16/22)為陰性表達(dá)，少數(shù)為弱陽(yáng)性表(27.3%),兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<；0.05),提示食管癌組織中g(shù)alectin3髙表達(dá).2.2Galectin3表達(dá)與食管鱗癌病理的關(guān)系Galectin3蛋白在臨床分級(jí)為I,II,III級(jí)食管癌中的陽(yáng)性率依次為66.7
