食管鱗癌組織中g(shù)alectin3與mmp2表達的意義

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1、食管鱗癌組織中g(shù)alectin3與MMP2表達的意義：石菲，彭貴勇，孫永剛，姚大鵬【摘要】目的：研究galectin3在食管癌組織中的表達及其與基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2的表達間的關(guān)系.方法：用免疫組化SP法分別檢測galectin3和MMP2在80例食管癌和22例正常食管組織中的表達情況.并對腫瘤病理分級、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進行統(tǒng)計學(xué)分析.結(jié)果：食管癌組織中Galectin3蛋白表達率為77.5%，顯著高于正常食管組織（27.3%,P<0.05）.Galectin3高表達與食管癌的病理分級、浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān).Galectin3與MMP2表達呈正相關(guān)（

2、P<0.05）.結(jié)論：Galectin3在食管癌中表達增強，它的高表達對判斷食管癌的惡性程度、浸潤甚至轉(zhuǎn)移有重要價值.MMP2的高表達使Galectin3上調(diào).【關(guān)鍵詞】食管腫瘤；半乳糖凝集素3；明膠酶A；免疫組織化學(xué)0引言Galectins(β半乳糖苷結(jié)合蛋白)是生物體內(nèi)廣泛存在的一大類結(jié)合蛋白，屬于凝集素家族.Galectin3是該家族的重要成員之一，它廣泛表達于上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞，存在于細(xì)胞質(zhì)及胞核內(nèi)，參與多種生物學(xué)過程，如：調(diào)節(jié)細(xì)胞—細(xì)胞、細(xì)胞—基質(zhì)間的相互作用，參與細(xì)胞的增殖、分化、局部免疫調(diào)節(jié)和凋亡等，與腫瘤的轉(zhuǎn)移、浸潤、生長和黏附密切相關(guān).目前，galec

3、tin3對惡性腫瘤演進的影響作用在前列腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸癌、胃癌和乳腺癌中已有研究，而它與食管鱗癌的關(guān)系鮮有報道.我們探討galectin3蛋白在食管鱗癌中的表達情況以及其與MMP2的關(guān)系.1材料和方法1.1材料第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院200609/200705手術(shù)病理科證實為食管鱗癌標(biāo)本80例，術(shù)前未行放化療；男47例，女33例.年齡27~80（平均46.6）歲.病理Ⅰ級30例，Ⅱ級32例，Ⅲ級18例；有、無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別為34和46例.取距病變組織5cm以上的食管正常組織22例作正常對照組.采取新鮮標(biāo)本后，即置于40g/L甲醛液固定過夜，次日取材、脫水、包埋.石蠟連續(xù)切

4、片，片厚4μm，行常規(guī)HE染色.即用型鼠抗人galectin3mAb為福州邁新生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；即用型兔多抗MMP2,SP試劑盒、DAB顯色試劑均由北京中杉公司提供.1.2方法免疫組織化學(xué)采用SP法，以間變型大細(xì)胞淋巴瘤作為陽性對照，PBS代替一抗作陰性空白對照.石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，用30mL/LH2O2室溫下孵育30min（以封閉內(nèi)源性過氧化物酶），PBS漂洗5min×3次.將切片置于pH6.0的枸櫞酸鹽緩沖液中，微波爐加熱修復(fù)抗原20min（溫度控制在95～100℃）.取出自然冷卻至室溫后，用PBS漂洗5min×3次.滴加100mL/L山羊血清室溫下孵育30min.傾去

5、血清，滴加一抗，置于濕盒內(nèi)，4℃冰箱過夜.同法沖洗切片，滴加生物素化二抗工作液，置于濕盒中，37℃孵育25min，同法沖洗切片，滴加鏈酶親和素過氧化物酶復(fù)合體（三抗），37℃孵育25min，再沖洗切片.滴加DAB顯色劑，鏡下觀察控制反應(yīng)時間，蒸餾水洗中止，切片蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化返藍，脫水封片.galectin3和MMP2均以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色細(xì)胞，采用陽性染色強度結(jié)合陽性細(xì)胞所占百分比進行判斷.在400倍視野下每張切片隨機觀察4個視野，將切片中平均陽性細(xì)胞比例及染色深淺分別計0～3分，切片中無陽性細(xì)胞，0分；陽性細(xì)胞＜25%，1分；26%～50%，2分；5

6、1%～75%，3分；>75%，4分.染色強度以多數(shù)細(xì)胞為準(zhǔn)：無著色，0分；淡黃色，1分；黃或深黃色，2分；褐或棕褐色，3分.再按這兩項指標(biāo)的積分相加將結(jié)果分為4級：0分為“”；1~2分為“+”；3~4分為“”；5～6分為“”.其中“”“”為強陽性表達.統(tǒng)計學(xué)處理：運用SPSS11.0統(tǒng)計分析軟件，率的比較采用χ2檢驗，galectin3表達與MMP2表達間的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān).2結(jié)果2.1食管鱗癌組織中g(shù)alectin3的分布Galectin3陽性信號呈棕黃色顆粒狀或線網(wǎng)狀染色，大多數(shù)病例定位于細(xì)胞質(zhì)（圖1A），少數(shù)位于間質(zhì).Galectin

7、3蛋白在腫瘤組織中呈異質(zhì)性表達，即在腫瘤的不同區(qū)域表現(xiàn)出不同的特點，或彌散分布，或呈小片狀、灶狀分布，染色強度亦不一致.食管癌組織中g(shù)alectin3陽性表達率77.5%(62/80)，正常食管黏膜組織中g(shù)alectin372.7%(16/22)為陰性表達，少數(shù)為弱陽性表（27.3%），兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示食管癌組織中g(shù)alectin3高表達.2.3Galectin3表達與MMP2表達的關(guān)系MMP2定位