康乃馨的離體快繁開(kāi)題報(bào)告.doc

《康乃馨的離體快繁開(kāi)題報(bào)告.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、`康乃馨的離體快繁開(kāi)題報(bào)告學(xué)生：平陽(yáng)駿馳凱班級(jí)：14生本2專(zhuān)業(yè)：生物技術(shù)學(xué)部：生物醫(yī)藥指導(dǎo)教師：嚴(yán)錚輝二〇一七年三月Word文檔`一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参镫x體快速繁育原理、方法和完整過(guò)程。二、實(shí)驗(yàn)原理康乃馨又名香石竹,花色艷麗,開(kāi)花時(shí)間長(zhǎng),裝飾效果好,是世界上最暢銷(xiāo)的切花之一,具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于病毒病侵害,常使植株矮化,花朵變小,花色產(chǎn)生斑點(diǎn),退色甚至不開(kāi)花,影響切花產(chǎn)量和質(zhì)量。通過(guò)莖尖分生組織培養(yǎng),能夠獲得“無(wú)病毒”的健康植株,對(duì)于引進(jìn)的少而新的脫毒種苗,再進(jìn)行一次莖尖培養(yǎng),進(jìn)一步降低基礎(chǔ)苗中的病毒含量,并通過(guò)組織培

2、養(yǎng)的方法快速繁殖,在短期,就可以獲得大量的脫毒試管苗,使引入材料迅速在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用,取得明顯的經(jīng)濟(jì)效益。三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料：1.材料康乃馨枝條2.儀器設(shè)備超凈工作臺(tái)，帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿，無(wú)菌水培養(yǎng)基MS+1mg/L6-BA剪刀，鑷子量筒，酒精燈，濾紙，蒸餾水，小刷子紗布，棉塞，牛皮紙，標(biāo)簽紙，肥皂，酒精噴壺3.試劑95%乙醇，70%酒精，70%酒精棉球四、培養(yǎng)基的配方（1）香石竹的生芽培養(yǎng)基Word文檔`MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+瓊脂(

3、8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培養(yǎng)瓶分裝10~15瓶。另外，需要制備無(wú)菌水20瓶（大培養(yǎng)瓶），每人3~4瓶，，紗布、碟子若干，后二者分別用報(bào)紙包好一同滅菌。（2）香石竹的繼代培養(yǎng)基MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+瓊脂(8g/L),pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培養(yǎng)瓶分裝10-15瓶。另外，需要制備無(wú)菌水20瓶（大培養(yǎng)瓶），每人3-4瓶，，紗布、碟子若干，后二者分別用報(bào)紙包好一同滅菌。（3）香石竹的生根培養(yǎng)基MS+生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA(0.

4、075mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培養(yǎng)瓶分裝10-15瓶。另外，需要制備無(wú)菌水20瓶（大培養(yǎng)瓶），每人3-4瓶，紗布、碟子若干，后二者分別用報(bào)紙包好一同滅菌。五、實(shí)驗(yàn)步驟1.滅菌（1）實(shí)驗(yàn)室及超凈臺(tái)消毒先進(jìn)行無(wú)菌室消毒，用紫外線照射30-45分鐘，地面消毒，紫外燈關(guān)閉約20min后方可進(jìn)去工作。對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒，開(kāi)啟無(wú)菌風(fēng)開(kāi)關(guān)，開(kāi)啟紫外，讓無(wú)菌風(fēng)吹上15-20min后方可工作。并用70%的酒精棉臺(tái)擦凈工作臺(tái)（2）外植體滅菌Word文檔`取從市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的康乃

5、馨枝條，去掉大的葉片，剪取帶腋芽的節(jié)結(jié)，用肥皂（洗潔精）清洗表面，再用自來(lái)水沖洗30-60s，然后在無(wú)菌室（超凈工作臺(tái)）用70%酒精浸沒(méi)20-40秒（根據(jù)材料的木質(zhì)化程度掌握具體的浸沒(méi)時(shí)間）。用0.2%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min,再用無(wú)菌水沖洗3-4次，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中的濾紙上待用。2.接種接種時(shí)先點(diǎn)燃酒精燈，鑷子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精燈上灼燒好的鑷子、剪刀取出一個(gè)側(cè)芽或小段莖，迅速打開(kāi)三角瓶口，將材料插入瓶，注意材料上下端的極性，不能倒插。在酒精燈邊塞回錫箔紙，用記號(hào)筆在標(biāo)簽紙上寫(xiě)明

6、材料、日期、實(shí)驗(yàn)人，并將標(biāo)簽貼在相應(yīng)試劑瓶上。3.培養(yǎng)條件25℃光照13h/天，光照1000lx。4.繼代培養(yǎng)：（1）無(wú)菌操作準(zhǔn)備將培養(yǎng)基及各種接種用具放入超凈工作臺(tái)，開(kāi)紫外燈，照射消毒20-30min,開(kāi)送風(fēng)開(kāi)關(guān)，關(guān)紫外燈，通風(fēng)10min后，打開(kāi)照明日光燈。洗手，用紗布吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺(tái)，擦拭培養(yǎng)基和無(wú)菌水瓶，點(diǎn)燃酒精燈，鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具灼燒滅菌，待冷卻后使用。2）無(wú)菌操作接種酒精燈火焰旁打開(kāi)香石竹芽苗培養(yǎng)基，用鑷子取出香石竹芽苗，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿，用解剖刀將芽苗簇切割成含2~3Word文檔`芽

7、苗，然后切去芽苗的上端。（3）培養(yǎng)將培養(yǎng)瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培養(yǎng)室進(jìn)行光照培養(yǎng)。整理、清潔超凈工作臺(tái)。（4）觀察記錄定期觀察培養(yǎng)情況，包括觀察日期、生長(zhǎng)情況、以及污染情況等，并做好記錄。3.誘導(dǎo)生根：用低濃度的吲哚乙酸或者萘乙酸或無(wú)激素的N6培養(yǎng)基誘導(dǎo)（1）無(wú)菌操作準(zhǔn)備將培養(yǎng)基、無(wú)菌水、及各種接種用具放入超凈工作臺(tái)，開(kāi)紫外燈，照射消毒20-30min,開(kāi)送風(fēng)開(kāi)關(guān)，關(guān)紫外燈，通風(fēng)10min后，打開(kāi)照明日光燈。洗手，用紗布吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺(tái)，擦拭培養(yǎng)基和無(wú)菌水瓶，點(diǎn)燃酒精燈，鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具灼

8、燒滅菌，待冷卻后使用。2）無(wú)菌操作接種酒精燈火焰旁打開(kāi)香石竹培養(yǎng)瓶，用鑷子取出香石竹芽苗，置于無(wú)菌不銹鋼碟子，用解剖刀將芽苗的每個(gè)小芽分開(kāi)。用鑷子將單個(gè)小芽插入生根培養(yǎng)基，每瓶接3個(gè)。蓋上瓶蓋，貼上標(biāo)簽，注明材料名稱(chēng)、接種日期和。（3）培養(yǎng)Word文檔`將培養(yǎng)瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培養(yǎng)室進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。整理、清潔超凈工作臺(tái)。（4