康乃馨的離體快繁開題報告.doc

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1、`康乃馨的離體快繁開題報告學(xué)生：平陽駿馳凱班級：14生本2專業(yè)：生物技術(shù)學(xué)部：生物醫(yī)藥指導(dǎo)教師：嚴(yán)錚輝二〇一七年三月Word文檔`一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参镫x體快速繁育原理、方法和完整過程。二、實(shí)驗(yàn)原理康乃馨又名香石竹,花色艷麗,開花時間長,裝飾效果好,是世界上最暢銷的切花之一,具有較高經(jīng)濟(jì)價值。由于病毒病侵害,常使植株矮化,花朵變小,花色產(chǎn)生斑點(diǎn),退色甚至不開花,影響切花產(chǎn)量和質(zhì)量。通過莖尖分生組織培養(yǎng),能夠獲得“無病毒”的健康植株,對于引進(jìn)的少而新的脫毒種苗,再進(jìn)行一次莖尖培養(yǎng),進(jìn)一步降低基礎(chǔ)苗中的病毒含量,并通過組織培

2、養(yǎng)的方法快速繁殖,在短期,就可以獲得大量的脫毒試管苗,使引入材料迅速在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用,取得明顯的經(jīng)濟(jì)效益。三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料：1.材料康乃馨枝條2.儀器設(shè)備超凈工作臺，帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿，無菌水培養(yǎng)基MS+1mg/L6-BA剪刀，鑷子量筒，酒精燈，濾紙，蒸餾水，小刷子紗布，棉塞，牛皮紙，標(biāo)簽紙，肥皂，酒精噴壺3.試劑95%乙醇，70%酒精，70%酒精棉球四、培養(yǎng)基的配方（1）香石竹的生芽培養(yǎng)基Word文檔`MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+瓊脂(

3、8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培養(yǎng)瓶分裝10~15瓶。另外，需要制備無菌水20瓶（大培養(yǎng)瓶），每人3~4瓶，，紗布、碟子若干，后二者分別用報紙包好一同滅菌。（2）香石竹的繼代培養(yǎng)基MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+瓊脂(8g/L),pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培養(yǎng)瓶分裝10-15瓶。另外，需要制備無菌水20瓶（大培養(yǎng)瓶），每人3-4瓶，，紗布、碟子若干，后二者分別用報紙包好一同滅菌。（3）香石竹的生根培養(yǎng)基MS+生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA(0.

4、075mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培養(yǎng)瓶分裝10-15瓶。另外，需要制備無菌水20瓶（大培養(yǎng)瓶），每人3-4瓶，紗布、碟子若干，后二者分別用報紙包好一同滅菌。五、實(shí)驗(yàn)步驟1.滅菌（1）實(shí)驗(yàn)室及超凈臺消毒先進(jìn)行無菌室消毒，用紫外線照射30-45分鐘，地面消毒，紫外燈關(guān)閉約20min后方可進(jìn)去工作。對超凈工作臺進(jìn)行消毒，開啟無菌風(fēng)開關(guān)，開啟紫外，讓無菌風(fēng)吹上15-20min后方可工作。并用70%的酒精棉臺擦凈工作臺（2）外植體滅菌Word文檔`取從市場上購買的康乃

5、馨枝條，去掉大的葉片，剪取帶腋芽的節(jié)結(jié)，用肥皂（洗潔精）清洗表面，再用自來水沖洗30-60s，然后在無菌室（超凈工作臺）用70%酒精浸沒20-40秒（根據(jù)材料的木質(zhì)化程度掌握具體的浸沒時間）。用0.2%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min,再用無菌水沖洗3-4次，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中的濾紙上待用。2.接種接種時先點(diǎn)燃酒精燈，鑷子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精燈上灼燒好的鑷子、剪刀取出一個側(cè)芽或小段莖，迅速打開三角瓶口，將材料插入瓶，注意材料上下端的極性，不能倒插。在酒精燈邊塞回錫箔紙，用記號筆在標(biāo)簽紙上寫明

6、材料、日期、實(shí)驗(yàn)人，并將標(biāo)簽貼在相應(yīng)試劑瓶上。3.培養(yǎng)條件25℃光照13h/天，光照1000lx。4.繼代培養(yǎng)：（1）無菌操作準(zhǔn)備將培養(yǎng)基及各種接種用具放入超凈工作臺，開紫外燈，照射消毒20-30min,開送風(fēng)開關(guān)，關(guān)紫外燈，通風(fēng)10min后，打開照明日光燈。洗手，用紗布吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺，擦拭培養(yǎng)基和無菌水瓶，點(diǎn)燃酒精燈，鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具灼燒滅菌，待冷卻后使用。2）無菌操作接種酒精燈火焰旁打開香石竹芽苗培養(yǎng)基，用鑷子取出香石竹芽苗，置于無菌培養(yǎng)皿，用解剖刀將芽苗簇切割成含2~3Word文檔`芽

7、苗，然后切去芽苗的上端。（3）培養(yǎng)將培養(yǎng)瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培養(yǎng)室進(jìn)行光照培養(yǎng)。整理、清潔超凈工作臺。（4）觀察記錄定期觀察培養(yǎng)情況，包括觀察日期、生長情況、以及污染情況等，并做好記錄。3.誘導(dǎo)生根：用低濃度的吲哚乙酸或者萘乙酸或無激素的N6培養(yǎng)基誘導(dǎo)（1）無菌操作準(zhǔn)備將培養(yǎng)基、無菌水、及各種接種用具放入超凈工作臺，開紫外燈，照射消毒20-30min,開送風(fēng)開關(guān)，關(guān)紫外燈，通風(fēng)10min后，打開照明日光燈。洗手，用紗布吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺，擦拭培養(yǎng)基和無菌水瓶，點(diǎn)燃酒精燈，鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具灼

8、燒滅菌，待冷卻后使用。2）無菌操作接種酒精燈火焰旁打開香石竹培養(yǎng)瓶，用鑷子取出香石竹芽苗，置于無菌不銹鋼碟子，用解剖刀將芽苗的每個小芽分開。用鑷子將單個小芽插入生根培養(yǎng)基，每瓶接3個。蓋上瓶蓋，貼上標(biāo)簽，注明材料名稱、接種日期和。（3）培養(yǎng)Word文檔`將培養(yǎng)瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培養(yǎng)室進(jìn)行黑暗培養(yǎng)。整理、清潔超凈工作臺。（4