人凝血酶抗凝血酶復合物(tat)酶聯(lián)免疫分析

《人凝血酶抗凝血酶復合物(tat)酶聯(lián)免疫分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、人凝血酶抗凝血酶復合物(TAT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號：CSB-E08431h檢測范圍：0.312ng/ml-20ng/ml最低檢測限：0.078ng/ml特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人TAT，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。有效期：6個月預期應(yīng)用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中TAT含量。說明1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。4．剛開

2、啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。實驗原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗TAT抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗TAT抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TAT呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)板(Assayplate)：一塊（96孔）。2.標準品（Standard）：2瓶(凍干品)。3.樣品稀釋液(Sampl

3、eDiluent)：1×20ml/瓶。4.生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液?（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。9.濃洗滌液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10.終止液（Stop

4、Solution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的試劑和器材1.標準規(guī)格酶標儀2.高速離心機3.電熱恒溫培養(yǎng)箱4.干凈的試管和Eppendof管5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器6.蒸餾水，容量瓶等標本的采集及保存1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。1.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。2.

5、細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細的記錄。最后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為20ng/ml，做系列倍比稀釋后，分

6、別稀釋20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml，0.312ng/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0ng/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制10ng/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）20ng/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生

7、物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液?的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。操作步驟實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1.加樣：分

8、別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液1