黑水纈草組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

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1、黑水纈草組織培養(yǎng)與快速繁殖研究【摘要】目的對黑水纈草愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基和生長的培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，構(gòu)建黑水纈草快速繁殖體系。方法通過篩選外植體，添加不同種類及濃度的生長調(diào)節(jié)劑對黑水纈草進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、芽增殖培養(yǎng)及生根培養(yǎng)。結(jié)果誘導(dǎo)愈傷組織適宜培養(yǎng)基：MS+0.5mg/LNAA+5.0mg/L6BA。芽增殖培養(yǎng)以MS+0.2mg/LNAA+10.0mg/L6BA為宜。生根培養(yǎng)以MS+0.1mg/LNAA為佳。結(jié)論利用組織培養(yǎng)技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)黑水纈草快速繁殖。【關(guān)鍵詞】黑水纈草組織培養(yǎng)快速繁殖　　AbstractOb

2、jectiveToprovidesomeneurensisSmir.exKomthroughstudyingonmediumarycultureofdifferentexplants,cultureofclusterbudsandtheirrootingcultureediumoftreatmentbinationsofaddingdifferenthormones.ResultsTheappropriatemediumfordifferentculturestagesg/LNAA+5.0mg/L6BAinca

3、lluscultureinduction,MS+0.2mg/LNAA+10.0mg/L6BAindifferentiationandsubcultureofclusterbuds,MS+0.1mg/LNAAinrootingculture.ConclusionRapidpropagationcanbeachievedurensisSmir.exKom.　　KeyurensisSmir.exKom;Tissueculture;Rapidpropagation　　黑水纈草（ValerianaamurensisSmi

4、r.exKom）為敗醬科（Valerianaceae）纈草屬（ValerianaLinn.）多年生草本植物。在我國產(chǎn)于東北，集中分布于長白山及其余脈地區(qū)。入藥部位為根和根莖。黑水纈草中主要含有環(huán)烯醚萜、倍半萜、生物堿和黃酮四大類型化學(xué)成分〔1〕，具有鎮(zhèn)靜、解痙、抗腫瘤活性、抗抑郁活性等作用，尤其是其倍半萜類和纈草酯類化合物具有很大的利用潛力，有望從中尋找出新型的抗抑郁藥和鎮(zhèn)靜藥〔2〕。目前纈草提取物及其制劑在國際上十分暢銷，銷售額列植物藥前10名〔3〕?！　∥覈嗬靡吧i草資源，不利于大規(guī)模生產(chǎn)。由于近年旅游開

5、發(fā)以及自然環(huán)境的破壞和無節(jié)制的采挖，野生狀態(tài)的纈草資源已急速下降。又由于纈草屬植物為多年生草本，自然生長十分緩慢，野生資源更趨于枯竭。開展黑水纈草的組織培養(yǎng)及快速繁殖的研究，就顯得更為迫切和重要。而關(guān)于纈草屬植物的組織培養(yǎng)研究有少數(shù)報(bào)道，陳建榮等〔4〕對誘導(dǎo)纈草愈傷組織作了初步研究。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，關(guān)于黑水纈草的組織培養(yǎng)尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究旨在通過對黑水纈草組織培養(yǎng)的研究，為建立其快速繁殖體系提供依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1材料本實(shí)驗(yàn)所用黑水纈草采自于黑龍江伊春綠潭地區(qū)，經(jīng)佳木斯大學(xué)生藥學(xué)教研室劉娟教授鑒定為黑

6、水纈草ValerianaamurensisSmir.exKom。實(shí)驗(yàn)所需試劑均為分析純?！　?.2儀器SA-1600-2JZ多功能超凈操作臺(tái)(上海稼豐園藝用品有限公司)；ZPQ-280D智能氣候培養(yǎng)箱(黑龍江東拓儀器制造有限公司);YXQ-LS-75SLL立式壓力蒸氣滅菌器(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);電子天平FA2004(上海恒平科技有限公司)?！　?.3培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件采用MS基本培養(yǎng)基，添加0.8%瓊脂，3%蔗糖及不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)pH值至5.8，121℃高壓滅菌30min，備用。所有培養(yǎng)

7、均在以下條件下進(jìn)行：溫度（25±1）℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1500～2000lx?！　?.4方法將材料經(jīng)流水沖洗30min后，置于超凈工作臺(tái)上消毒接種。先于70%酒精中漂洗30s，再用0.1%HgCl2消毒8min，最后用無菌水沖洗7～8次，將消毒后的莖尖、莖段和葉柄切成長約1～1.5cm的小段，葉片切成0.5cm2大小，接種于預(yù)先配制好的培養(yǎng)基上，用于誘導(dǎo)愈傷組織?！　?結(jié)果　　2.1不同外植體對黑水纈草愈傷組織誘導(dǎo)的影響為了確定黑水纈草愈傷組織的最佳誘導(dǎo)部位，把莖尖、莖段、葉柄基部、葉柄中部和葉片分

8、別接種于含有MS+0.2mg/LNAA（萘乙酸）+5.0mg/L6BA（6芐氨基腺嘌呤）的培養(yǎng)基中。接種20d后，統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率（見表1）。結(jié)果表明，在含有MS+0.2mg/LNAA+5.0mg/L6BA的MS培養(yǎng)基中，以莖尖和葉柄基部為外植體誘導(dǎo)愈傷組織較適宜，帶節(jié)間的莖段誘導(dǎo)叢生芽較適宜?！　”?不同外植體對愈傷組織誘導(dǎo)的影響（略）　　2.2不同植物生長調(diào)節(jié)