黃葵對慢性腎功能不全大鼠保護機制的研究論文

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1、黃葵對慢性腎功能不全大鼠保護機制的研究論文【摘要】目的觀察黃葵對慢性腎功能不全大鼠腎功能及腎組織轉化生長因子（TGF）β1和smad7表達的影響。方法采用腺嘌呤法建立大鼠慢性腎功能不全模型，隨機分為正常組、非治療組和治療組，治療組予以黃葵（2g/kg）每日1次灌胃。治療4ad7的表達。結果非治療組大鼠的24h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐較正常組明顯增加（P＜0.01），而治療組大鼠24h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐較非治療組減少（P＜0.05）。非治療組大鼠腎組織TGFβ1、smad7表達較正常組明顯增加（P＜0.01），治療組腎

2、組織TGFβ1、smad7表達較非治療組減弱（P＜0.05）。結論黃葵膠囊可降低慢性腎功能不全大鼠24h尿蛋白、血尿素氮、肌酐水平，抑制腎組織TGFβ1和smad7表達。黃葵膠囊對慢性腎功能不全的保護機制可能與降低腎臟TGFβ1和smad7表達有關?！娟P鍵詞】黃葵；慢性腎功能不全；腺嘌呤；轉化生長因子β1；smad7現代藥理學研究發(fā)現.freelad7蛋白表達及腎臟病理變化的影響，探討黃葵膠囊對慢性腎功能不全的療效及作用機制。1材料與方法1.1材料黃葵膠囊（江蘇蘇中藥業(yè)集團有限公司生產，國藥準字Z19990040）。腺嘌呤(洛

3、陽化工有限公司，產品批號2007109)。兔抗TGFβ1、Smad7抗體（武漢博士德生物有限公司）；EnVision免疫組化試劑盒（廣州基因有限公司）；BCA試劑盒（美國Pierce）。1.2動物分組和模型建立雄性SD大鼠60只(由沈陽軍區(qū)總醫(yī)院實驗動物中心提供，SPF級)，7周齡，體重190±20g。適應性飼養(yǎng)1g/kg灌胃，6，行HE、PAS及Masson染色，觀察腎小球硬化及腎間質纖維化的程度。1.3.3腎臟免疫組織化學檢測采用二步法，3μm腎組織石蠟切片梯度脫臘水化后，3％過氧化氫封閉內源性過氧化物酶，PBS緩沖液（0.01

4、mol/L，pH7.4）洗滌，正常兔血清封閉，依次加入TGFβ1抗體、EnVision標記Ⅱ抗，DAB顯色，蘇木精復染，樹脂封片。有棕黃色或棕紅色顆粒狀物質沉積為陽性細胞。采用IMP2000圖像分析系統(tǒng)，對圖像進行灰度變換，使陽性面積與背景分開，進行自動測量。1.3.4蛋白印跡分析為檢測TGFβ1及smad7在腎臟的表達，各組取約100mg腎組織置于1ml裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑PMSF100μg/μl，aprotinin1μg/ml，leupeptin1μg/ml），勻漿后冰浴30min，然后4℃12000r/min離心20

5、min。提取蛋白后用BCA法測量蛋白濃度。取等量蛋白質進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，半干法轉移至聚氟乙烯膜上，封閉液封閉，加入1∶200稀釋的TGFβ1抗體，4℃過夜。0.05％TBST洗膜3次，ECL顯影。1.4統(tǒng)計學處理計量資料采用x±s表示，采用SPSS13.0軟件包。各組間均數比較采用單因素方差分析，(方差齊時用LSD法、方差不齊時用Tamhane法)。2結果2.1尿蛋白定量變化非治療組和治療組大鼠尿蛋白排泄明顯高于正常組(P＜0.01)；治療組大鼠尿蛋白定量與非治療組比較有所降低(P＜0.05)，見表1。2.2血清生化指

6、標變化非治療組和治療組大鼠血肌酐、尿素氮明顯高于正常組(P＜0.01)；治療組大鼠血肌酐、尿素氮與非治療組比較有所降低(P＜0.05)，見表1。2.3組織病理學改變和半定量分析在HE染色中，非治療組大鼠可見明顯的腎小球增生，系膜增殖，腎小球毛細血管部分塌陷，球囊黏連，部分腎小球完全硬化，間質有炎細胞浸潤，部分腎小管已萎縮，系膜外基質顯著增加（圖1）。Masson、PAS染色可見明顯的腎小球硬化、腎間質纖維化。治療組與非治療組比較，腎小球損傷、硬化輕，腎間質炎細胞浸潤少，間質纖維化。半定量方法計算腎小球硬化指數(GSI)，評估腎小球硬化

7、程度。治療組和非治療組GSI分別為60.13±12.28、88.24±14.35，較正常組GSI(2.48±1.14)明顯增高(P＜0.05)，但治療組較非治療組明顯降低，兩組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。2.4腎組織免疫組織化學結果非治療組大鼠與正常組相比TGFβ1表達明顯增強，而smad7表達明顯減弱（P＜0.01），治療組與非治療組比較TGFβ1表達減弱而smad7表達增強（P＜0.05）。見表2，圖2，圖3。表1各組大鼠尿蛋白定量、血尿素氮、肌酐水平表2免疫組化檢測各組大鼠TGFβ13討論目前研究表明，TGFβ1和

8、其受體下游的信號轉導因子smad7蛋白在促進腎小球纖維化及腎小管間質纖維化方面起重要作用。TGFβ1是迄今已知作用最強的一種促腎纖維化的細胞因子，具有調節(jié)細胞的增殖、分泌、遷移和凋亡等多種生物學活性。TGFβ1在腎纖