正交法優(yōu)化植物生長調(diào)節(jié)劑在黃芪愈傷組織生長中的應(yīng)用

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1、正交法優(yōu)化植物生長調(diào)節(jié)劑在黃芪愈傷組織生長中的應(yīng)用：步營，陳顯化，王子茜，張宗申【摘要】　　目的研究膜莢黃芪葉愈傷組織誘導(dǎo)、生長及黃芪多糖合成的最佳生長調(diào)節(jié)劑組合。方法以膜莢黃芪葉為外植體，運用正交設(shè)計研究6-BA、2,4-D和NAA等3種植物生長調(diào)節(jié)劑組合對愈傷組織誘導(dǎo)、培養(yǎng)及黃芪多糖合成的影響。結(jié)果分別以誘導(dǎo)率、相對生長速率和黃芪多糖含量為指標(biāo)，結(jié)果表明NAA和6-BA對愈傷組織誘導(dǎo)率影響顯著，6-BA、2,4-D和NAA都對愈傷組織的生長影響顯著，2,4-D和NAA對黃芪多糖合成影響顯著。結(jié)論誘導(dǎo)愈傷組織

2、的最佳培養(yǎng)基為：MS+2,4-D（0.5mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）；愈傷組織生長的最佳培養(yǎng)基為：MS+2,4-D（0.5mg·L-1）+6-BA（2.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）；促進(jìn)黃芪多糖合成的最佳培養(yǎng)基為：MS+2,4-D（1.0mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（1.0mg·L-1）。【關(guān)鍵詞】膜莢黃芪植物生長調(diào)節(jié)劑愈傷組織正交設(shè)計黃芪多糖　　Abstract：ObjectiveTostudytheoptimumbi

3、nationsofplantgrotheleavesofAstragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.MethodsTakingtheleavesofAstragalusMembranaceus(Fisch.)Bgeasexplants,threekindsofplantgroeters,includinginductionrate，relativegroatingtheefficiencyofthreeregulators,bothNAAand6-BAcouldinducecallusm

4、osteffectively,threeof6-BA,2,4-DandNAAallcouldaffectthegroarkably,andboth2,4-DandNAAcouldpromotethesynthesisofpolysaccharideseffectivelyasparedalculturemediumforcallusinductionis:MS+2,4-D（0.5mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）；Theoptimalculturemediumforca

5、llusgrog·L-1）+6-BA（2.0mg·L-1）+NAA（2.0mg·L-1）;andtheoptimalculturemediumforthesynthesisofAstragaluspolysaccharidesis:MS+2,4-D（1.0mg·L-1）+6-BA（1.0mg·L-1）+NAA（1.0mg·L-1）.　　Keyembranaceus(Fisch.)Bge.；Plantgroembranaceus(Fisch.)Bge.和蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fis

6、ch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao是它的法定基原，為正品。黃芪的藥用成分主要是皂苷類、黃酮類和多糖等，在抗衰老、增強(qiáng)免疫力、強(qiáng)心降壓等方面有重要的作用［2，3］。由于長期大量、無節(jié)制采挖和環(huán)境的污染，造成野生黃芪資源幾近枯竭［4］；而人工栽培的藥用黃芪，存在著勞動強(qiáng)度大、品質(zhì)控制困難以及可耕地減少等限制因素。所以，利用生物技術(shù)大規(guī)模生產(chǎn)黃芪原材料，滿足日益增長的醫(yī)藥市場需要，成為解決黃芪資源不足的重要途徑之一?！　”疚囊阅でv黃芪Astragalusmembranaceus(Fi

7、sch.)Bge.葉片為外植體，應(yīng)用正交設(shè)計實驗，研究6-BA，NAA和2,4-D對愈傷組織的誘導(dǎo)、生長和黃芪多糖合成的影響，以期篩選適宜的生長調(diào)節(jié)劑組合?！　?材料與方法　　1.1材料供試為盆栽膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的幼嫩葉片?！　?.2正交實驗設(shè)計采用L9(34)正交設(shè)計，研究6-BA，NAA和2,4-D等3種植物生長調(diào)節(jié)劑對愈傷組織誘導(dǎo)和生長以及黃芪多糖合成的影響，因素水平見表1。采用MS基本培養(yǎng)基，其中含30g·L-1的蔗糖和8g·L-1的瓊脂，pH

8、5.8。本文所有正交實驗均用同一實驗設(shè)計。實驗結(jié)果用正交設(shè)計助手II專業(yè)版v3.1進(jìn)行極差分析和方差分析。表1因素水平（略）　　1.3愈傷組織誘導(dǎo)與培養(yǎng)選取生長良好的黃芪植株，取幼嫩葉片，自來水沖洗干凈，75%酒精消毒30s，0.1%HgCl2消毒7min，然后用無菌水沖洗4次，無菌濾紙吸干水分，切成0.5cm2的小塊，接種在正交設(shè)計的9種培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每種接5瓶，每瓶接5片。培養(yǎng)條件