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1、影響黃芪愈傷組織生長(zhǎng)和黃芪黃酮合成的因素論文【摘要】目的研究培養(yǎng)基成分和光照對(duì)黃芪愈傷組織生長(zhǎng)和黃酮類化合物形成的影響。方法使用不同培養(yǎng)基并改變其中碳源、氮源、磷酸鹽、鈣鹽的濃度,在黑暗和光照條件下進(jìn)行黃芪愈傷組織培養(yǎng),分光光度法檢測(cè)愈傷組織中黃酮類化合物的含量。結(jié)果黃芪黃酮積累的最佳條件是(24±1)℃暗培養(yǎng),培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基(附加0.5mg·L-12,4-D和1.0mg·L-16-BA),其中含有80g·L-1蔗糖,NH+∶NO3-為1∶2(氮源總濃度為60mmol·L-1),1.5mmol·L-1KH2PO4,1.
2、496mmol·L-1CaCl2。結(jié)論蔗糖作為碳源最有利于黃芪愈傷組織生長(zhǎng)和黃芪黃酮的生物合成?;旌系从欣邳S芪黃酮類化合物的合成?!娟P(guān)鍵詞】膜莢黃芪;愈傷組織;黃芪黃酮;培養(yǎng)基成分Abstract:Objective:Tostudytheeffectsofcultureponentsandilluminationoncallusgroembranaceus(Fisch.)Bge.Methods:Adjustedtheconcentrationofcarbon,nitrogen,phosphateandcalciuminth
3、eculturesolution,andkepttheastragaluscallusunderdarkorillumination,thendetectedthecontentofflavonoidsbyspectrophotometry.Results:Theoptimumconditionoftotalflavonoidsofastragalusaccumulationediumg·L-12,4-Dand1.0mg·L-16-BA)mol·L-1KH2PO4and1.496mmol·L-1CaCl2,theproport
4、ionofNH+andNO3-mol·L-1).Conclusion:Sucrose,selectedassourceofcarbonismorefavoredforthecallusgroaltoseare.Andmixednitrateisfavoredforthesynthesisofflavonoidspounds.Keyembranaceus(Fisch.)Bge.;Callus;Totalflavonoidsofastragalus;Culturebaseponent黃芪是豆科黃芪屬植物.freelembranac
5、eus(Fisch.)Bge.和蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao是它的法定基原,為正品。研究表明黃酮是黃芪主要的活性成分之一,有廣泛的藥理作用,如清除自由基[2]、調(diào)節(jié)免疫、抗病毒、抑制血管內(nèi)皮單層通透性增加等[3]。由于臨床上對(duì)黃芪藥材的需求量大增,黃芪野生資源破壞嚴(yán)重,產(chǎn)量日趨下降,有的產(chǎn)區(qū)種群已瀕臨滅絕[4],而黃芪人工栽培存在生活周期長(zhǎng)、存活率低、勞動(dòng)強(qiáng)度大、農(nóng)藥殘留超標(biāo)、品質(zhì)控制困難和有效成分較低等弊端,因此利用植物組織培
6、養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行黃芪次級(jí)代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)是解決目前供需矛盾的有效途徑之一。目前,對(duì)黃芪中黃酮類物質(zhì)的研究主要集中在其藥理作用上,對(duì)黃芩愈傷組織培養(yǎng)和黃酮類物質(zhì)次生合成的研究尚少見報(bào)道。本文研究不同培養(yǎng)基成分對(duì)黃芪愈傷組織生長(zhǎng)和黃酮類物質(zhì)積累的影響,旨在為黃芪規(guī)?;a(chǎn)黃酮類物質(zhì)提供參考。1材料與方法1.1材料選用實(shí)驗(yàn)室盆栽膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的幼嫩葉片為外植體材料。1.2愈傷組織誘導(dǎo)與培養(yǎng)選取生長(zhǎng)良好的黃芪植株,取幼嫩葉片,自來水沖洗干凈,75%酒精消毒30s,再用0.1%HgC
7、l2溶液消毒7min,然后用無菌水沖洗4次,無菌濾紙吸干水分,切成0.5cm2的小塊,接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS/6,7-V+0.5mg·L-12,4-D+1.0mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%瓊脂,pH5.8)上,(24±1)℃暗培養(yǎng),大約3d時(shí)葉片邊緣開始膨脹,第7天時(shí)邊緣處長(zhǎng)出愈傷組織,30d后挑選生長(zhǎng)良好的愈傷組織,稱重后繼代培養(yǎng),30d后收獲稱重。1.3黃芪愈傷組織測(cè)試指標(biāo)干重增量=最終收獲干重-接種干重量黃芪黃酮產(chǎn)量=干重增量×黃芪黃酮含量稱量鮮重時(shí),從培養(yǎng)容器中取出的黃芪愈傷組織,先用濾紙吸凈其表面水分。測(cè)定
8、干重時(shí),從培養(yǎng)容器中取出的黃芪愈傷組織置于50℃下干燥至恒重。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。1.4黃芪黃酮含量測(cè)定1.4.1黃芪黃酮的提?。?]準(zhǔn)確稱取已粉碎的愈傷組織1.500g,加入20倍量的80%乙醇超聲波(頻率:40kHz,功率:500S培養(yǎng)基有利于愈傷組織的生長(zhǎng)和黃芪黃酮的