吡格列酮對內(nèi)皮祖細胞增殖、凋亡及功能的影響的論文

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1、吡格列酮對內(nèi)皮祖細胞增殖、凋亡及功能的影響的論文作者：邸春霞，陸慶明，郭文怡，王海昌，張榮慶，殷忠【摘要】目的：觀察不同濃度吡格列酮對大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細胞（epcs）增殖、凋亡和功能的影響，并探討其可能的作用機制.方法：正常sd大鼠24只，隨機分為a組（對照組）和b,c,d組［吡格列酮組劑量依次為10，20，40mg/（kg·d）］，灌胃處理10d后斷頸處死，密度梯度離心法獲取骨髓單個核細胞，經(jīng)鑒定后證實為epcs.每組細胞培養(yǎng)4d后消化、計數(shù)并用完全培養(yǎng)液培養(yǎng).24h后檢測no生成量，3d后檢

2、測凋亡情況，7d后檢測增殖能力.結(jié)果：與a組相比，b,c,d組epcs增殖能力明顯增高［b，c，d組a490nm分別為（0.423±0.004）,（0.680±0.008）,（0.443±0.005）vsa組a490nm（0.143±0.006）,p<0.01］；凋亡程度降低［b，c，d組分別為(32.8±0.8)%，(30.9±2.3)%，(33.0±3.9)%vsa組(40.1±1.1)%,p<0.01］；培養(yǎng)上清中no濃度顯著提高［b，c，d組分別為（29.2±3.7），（41.

3、0±7.7），（28.7±6.4）μmol/lvsa組（18.9±1.4）,p<0.05］；與c組相比，b組和d組促進epcs增殖能力弱（p<0.01），培養(yǎng)上清中no濃度相對低（p<0.05）.結(jié)論：不同濃度吡格列酮均能提高epcs數(shù)量和功能；20mg/（kg·d）吡格列酮對epcs的作用較強.【關(guān)鍵詞】吡格列酮；內(nèi)皮祖細胞；糖尿病0引言血管內(nèi)皮在心血管疾病發(fā)病機制中起重要作用，多種心血管疾病都伴有內(nèi)皮功能障礙.內(nèi)皮祖細胞(epcs)是血管內(nèi)皮的前體細胞，在特定應(yīng)激條件下可分泌

4、促血管生長因子并參與內(nèi)皮修復(fù)和新生血管形成（包括血管新生和血管發(fā)生）［1］.研究［2-3］發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者的epcs增殖能力減退，體外黏附、形成毛細血管的能力也降低.吡格列酮是一種噻唑烷二酮類胰島素增敏劑，對2型糖尿病有較好的降糖效果和耐受性.研究［4］表明，吡格列酮可以促進epcs介導(dǎo)的新生血管形成，但具體作用機制不明.我們擬探討體外培養(yǎng)條件下，不同濃度吡格列酮預(yù)處理對正常大鼠的骨髓源性epcs增殖、凋亡及功能的變化，為改善內(nèi)皮損傷提供實驗依據(jù).1材料和方法1．1材料雄性sd大鼠24只，體質(zhì)量7

5、0～80g（第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心）；m199培養(yǎng)基（美國gibco公司）；胎牛血清（美國hyclon公司）；血管內(nèi)皮生長因子（vegf，美國biovision公司）；堿性成纖維細胞生長因子（bfgf，英國peprotech公司）；乙?；兔芏戎鞍祝╠iiacldl，德國invitrogen公司）；胰島素和荊豆凝集素i（fitcueai，美國sigma公司）；ac133和cd34（英國ebioscience公司）；flk1（美國chemicon公司）；淋巴細胞分離液（天津灝洋生物制品

6、科技有限責任公司）；no檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；鹽酸吡格列酮（成都宇洋高科技發(fā)展有限責任公司）.1．2方法1．2．1實驗分組及吡格列酮干預(yù)將大鼠隨機分為4組，每組6只，a組（對照組）給予9ml/l注射用生理鹽水，b，c，d組分別給予鹽酸吡格列酮10，20，40mg/（kg·d）.灌胃喂養(yǎng)10d.1．2．2分離培養(yǎng)epcs頸椎脫臼法處死大鼠，剝?nèi)テつw，取四肢置750ml/l乙醇5min；將骨兩端軟骨用無菌剪刀剪除，用m199培養(yǎng)液沖洗骨髓腔；將骨髓細胞懸液輕置于淋巴細胞分離液表面、離心

7、并吸取乳白色單核細胞層，m199培養(yǎng)液洗滌后用含vegf，bfgf的完全培養(yǎng)液重懸、計數(shù)并接種到培養(yǎng)瓶中，4h后將培養(yǎng)瓶翻面.1．2．3epcs表型鑒定培養(yǎng)6d的細胞用2.5g/l胰酶和0.2g/l乙二胺四乙酸消化并接種于蓋玻片.24h后向細胞爬片孔內(nèi)加入10mg/ldiiacldl100μl并置37℃孵育1h，多聚甲醛室溫固定10min，pbs漂洗后加入10mg/lfitcueai100μl，避光孵育1h，pbs洗滌、晾干后封片，激光共聚焦顯微鏡觀察.1．2．4no檢測將培養(yǎng)4d的細胞消

8、化、計數(shù)后以1.5×104/孔接種于96孔板培養(yǎng).按no試劑盒說明書，24h后于每孔吸上清100μl，采用硝酸還原酶法特異性將各孔上清液中no3-還原為no2-，并測定no2-濃度，從而間接反映no含量.1．2．5凋亡檢測將培養(yǎng)4d的細胞消化，不完全培養(yǎng)液(無血清)培養(yǎng)24h后加入含血清的完全培養(yǎng)液培養(yǎng).3d后再次消化貼壁細胞，以1000r/min離心5min后棄上清，行雙標記流式細胞術(shù)檢測.1．2．6增殖能力檢測分離epcs并以1.5×104/孔接種96孔板.培養(yǎng)7d后向每孔培養(yǎng)