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《云南‘火把梨’結(jié)構(gòu)基因ufgt及轉(zhuǎn)錄因子克隆與分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、云南‘火把梨’結(jié)構(gòu)基因UFGT及轉(zhuǎn)錄因子克隆與分析1文獻(xiàn)綜述1.1.果實花色素苷果皮色澤形成中花色素苷是重要的色素類群(白新祥等，2006)。截止目前，自然界中已發(fā)現(xiàn)了600多種花色素苷類物質(zhì)。植物中主要含有花葵素、類芍藥素、花翠素、矢車菊素、錦葵色素、牽牛花素等6種花色素類型(Groteummorifolium)、月季(Rosahybrida)和康乃馨(Dianthuscaryophyllus)等，因為不能形成飛燕草素而缺少紫色和藍(lán)色的品種。梨果皮顏色是最重要的經(jīng)濟(jì)性狀之一，是決定梨市場接受度的重要因素，果皮顏色能激起消費(fèi)者購買和消費(fèi)的欲望，因為消費(fèi)者常把這些
2、與成熟和美味聯(lián)系到一起(KingandCliff，2002)。此外，不同國家和地區(qū)的消費(fèi)者對果實顏色的偏好也不一樣(Cliffetal.，2002)。新西蘭消費(fèi)者喜歡片紅蘋果，加拿大的消費(fèi)者喜歡全紅蘋果，不列顛哥倫比亞的消費(fèi)者能廣泛接受一系列的蘋果。每個國家、地區(qū)贈送節(jié)日禮物時，對顏色的要求也不盡相同(Iglesiasetal.，2008)。果皮顏色是辨別栽培品種的一個重要特征，并且越來越多人對有顏色的育種材料感興趣。在新西蘭(Chagneetal.，2007).和歐洲，有人正致力于培育一個紅色果肉的蘋果栽培種。.1.2花色素苷積累的基因調(diào)控對花色苷生物合成有影
3、響表(1-1)。第一類是已被廣泛研究了的編碼色素合成的必需酶類(結(jié)構(gòu)基因或生物合成基因)(Takosetal.，2006b)。另一類是由轉(zhuǎn)錄因子組成的調(diào)控基因，能影響花色素苷的積累強(qiáng)度和積累模式，而且還廣泛調(diào)控許多不同的生物合成基因的表達(dá)(Goodrichetal.，1992)。有研究顯示果皮的紅色是由兩個互補(bǔ)位點調(diào)控的(YB1的等位基因MYB1-1已經(jīng)被Takos等人(Takosetal.，2006a)鑒定。果實和葉片的紅色都是由Rni軌跡控制的(Chagneetal.，2007)。調(diào)控基因決定果實色素積累模式的相關(guān)研究還比較少。根據(jù)Janick等人(Jani
4、cketal.，1996)的研究，片紅蘋果經(jīng)過雜交后，子代通常是片紅或無色且無條紋，這意味著存在具額外作用的遺傳基因。在蘋果育種工作中，由于基因組選擇(CS)的應(yīng)用減少了世代隔離，并加強(qiáng)了選擇強(qiáng)度，顯著提高了育種效率，縮短了育種周期，豐富了果實品質(zhì)的表型，使其成為一種可靠地替代傳統(tǒng)果實性狀選擇的方法(Satishetal.，2012)。..2云南火把梨UFGT、EGA提取試劑盒(E.Z.N.A.TMPlantRNAKit)提取，反轉(zhuǎn)錄試劑盒(QuantscriptRTKit)，DNA割膠回收試劑盒，2TaqPCRMasterMixKit與DLmarker2000
5、均購自天根生物技術(shù)有限公司和北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，4SGreen無毒型核酸染料購自生工生物工程(上海)股份有限公司；常規(guī)化學(xué)試劑及藥品，購自Sigma公司或者國產(chǎn)AR級試劑；PCR引物及測序引物是由上海上海捷瑞生物工程有限公司合成；測序則是由上海生物工程股份有限公司完成的。2.1.1.3主要儀器SANYO-80℃冰箱(ULT2586-4-V46)、Haier冰箱(sc-329)、AIRTECH超凈工作臺、eppendorf離心機(jī)、biochrom紫外分光光度計(LIBYAS22)、DYY-8C型電泳儀(北京市六一儀器廠)、LGIOOB烘箱、TDA溫度控制
6、儀、TOMY高壓滅菌鍋、biometraPCR儀、LG微波爐(EGA提取試劑盒(E.Z.N.A.TMPlantRNAKit)提取，本試驗分別提取了幼葉、花瓣、果皮的總RNA，電泳檢測結(jié)果如(圖2-1)，25S和18S都清晰可見，并于-80℃冰箱保存，用于cDNA第一鏈的合成。以云南火把梨幼葉cDNA第一鏈為模板進(jìn)行同源PCR擴(kuò)增，得到約為1500bp的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物(圖2-2)，該產(chǎn)物片段的大小與預(yù)期一致。直接把PCR產(chǎn)物送往上海生物工程股份有限公司進(jìn)行雙向測序，對結(jié)果進(jìn)行拼接得到長度為1465bp的基因片段，編碼479個氨基酸的蛋白質(zhì)(圖2-3)。并利用在線軟
7、件與其它物種的UFGT氨基酸序列進(jìn)行BLAST同源比對，結(jié)果顯示，該基因片段編碼的氨基酸序列與蘋果(Malusdomestica，BAI44431)、克萊門柚(Citrusclementina，XP_006443177)UFGT氨基酸序列的相似性分別是99%、97%，與葡萄(Vitisvinifera，XP_002270947)、野草莓(Fragariavesca，XP_004301659)UFGT氨基酸序列相似性均為96%，與碧桃(Prunuspersica，EMJ19151)、甜櫻桃(Prunusavium，ADZ54786)、玫瑰(Rosa，BAF8094
8、6)、蓖麻(Ricinu
