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《枸杞多糖對(duì)ccl4引起的建鯉急性肝損傷的保護(hù)作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、枸杞多糖對(duì)CCl4引起的建鯉急性肝損傷的保護(hù)作用 肝臟是魚(yú)體內(nèi)最大的實(shí)質(zhì)性器官，其功能很強(qiáng)大，對(duì)來(lái)自體內(nèi)外的許多非營(yíng)養(yǎng)性物質(zhì)，如各種藥物、毒物以及體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物等有生物轉(zhuǎn)化作用［1］，具有很好的解毒功能和代謝功能，因此，肝臟更容易受到外環(huán)境、病毒、細(xì)菌等因素的影響。目前，隨著集約化養(yǎng)殖的不斷發(fā)展，難免會(huì)出現(xiàn)對(duì)魚(yú)類日常管理的疏忽，如強(qiáng)化投飼和亂用藥物，飼喂霉變飼料等［2］，而這些因素會(huì)對(duì)魚(yú)類肝臟造成比較嚴(yán)重的損害，出現(xiàn)以肝膽綜合癥為主要特征的魚(yú)類疾病，即所謂的魚(yú)類肝病(Theliverdiseaseoffishes)［3］。關(guān)于本病，并沒(méi)有有效地治療藥物，死亡率較高，且治療主
2、要是以西藥為主，而西藥容易出現(xiàn)藥物殘留等問(wèn)題，會(huì)間接影響魚(yú)的品質(zhì)，進(jìn)而影響到人類的健康，因此研究開(kāi)發(fā)出綠色環(huán)保的中成藥就顯得迫在眉睫?！ 〗陙?lái)，由于中草藥具有綠色無(wú)污染、毒副作用小，以及能夠提高機(jī)體的免疫和防御功能等特點(diǎn)［4］，現(xiàn)已廣泛的應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物的病害防治及健康養(yǎng)殖中［5－6］。枸杞(LyciumchinenseMill-er)為茄科枸杞屬(LyciumLinn．)植物，含有多糖、粗蛋白、亞油酸等多種營(yíng)養(yǎng)成分，而枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide，LBP)為枸杞中的主要活性成分之一［7］?，F(xiàn)代藥理研究表明，枸杞多糖具有護(hù)肝、保護(hù)生殖系統(tǒng)、
3、降血脂、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等多種功能［8－11］。目前，關(guān)于枸杞多糖的研究報(bào)道主要有:王遠(yuǎn)吉［12］研究發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖可以提高鯽魚(yú)血清溶菌酶活力，且與枸杞多糖呈濃度依賴性關(guān)系。宋毅等［13］研究發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖可以增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能。然而，水產(chǎn)領(lǐng)域有關(guān)枸杞多糖的保肝作用卻鮮有報(bào)道?！ ∷穆然?CCl4)作為一個(gè)評(píng)價(jià)天然藥物保肝作用的肝毒性模型藥物，已廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究當(dāng)中。本研究以化學(xué)藥物CCl4來(lái)進(jìn)行造模，通過(guò)測(cè)定一些肝功能生化指標(biāo)的變化來(lái)評(píng)價(jià)枸杞多糖對(duì)建鯉急性肝損傷的保護(hù)作用，為枸杞多糖在水產(chǎn)肝膽疾病的防治提供理論依據(jù)?！ ?材料與方法 1．1材料 1．1．1供試魚(yú)
4、 建鯉來(lái)自于中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心漁場(chǎng)，體質(zhì)健康，6月齡，大小規(guī)格基本一致，150g左右，飼養(yǎng)于循環(huán)水系統(tǒng)中，25oC，商品飼料(40%粗蛋白、10%粗脂肪、10%灰分、能量21KJg－1DM)飼喂一周，每天投喂2次?！ ?．1．2藥品和試劑 枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide，LBP)購(gòu)自南通四海植物提取有限公司。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物岐化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、白蛋白(Alb)、谷胱甘肽(GSH)及總抗氧化能力(T
5、-AOC)等試劑盒購(gòu)自于南京建成生物工程研究所科技有限公司;總蛋白(TP)測(cè)定試劑盒購(gòu)自于碧云天生物技術(shù)研究所。CCl4(分析純)購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司?！ ?．2方法 1．2．1枸杞多糖的提純 枸杞多糖通過(guò)經(jīng)典的水煮醇沉方法［14－15］分離提純:取300g粗枸杞多糖室溫下浸潤(rùn)于1000mL超純水中過(guò)夜處理，然后加熱煎煮2h用定性濾紙過(guò)濾除去不溶雜質(zhì)，上清液進(jìn)行離心(500g，10min)，再用0.22μm的過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，將上清液收集起來(lái)，用乙醇進(jìn)行3次沉淀?！ ∑溟g有絮狀沉淀產(chǎn)生，靜置1h，將靜置后固形物依次以95%乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮洗滌除雜，待絮狀沉淀
6、分離出來(lái)后，轉(zhuǎn)速2500rmin－1，離心時(shí)間3min，95%乙醇洗滌沉淀3次，在溫度為80oC的烘箱中烘干?！ ?．2．2分組及處理 將循環(huán)水系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)1周的建鯉隨機(jī)分為6組，分別設(shè)為空白對(duì)照組(CK)、模型組(CCl4)、枸杞多糖藥物對(duì)照組(LBPCK)、處理組(枸杞多糖0.1，0.5，1.0gkg－1組)，其中CK組及CCl4模型組:飼喂普通商品飼料;枸杞多糖藥物對(duì)照組(LBPCK):飼喂含1.0gkg－1枸杞多糖的飼料;處理組:分別飼喂含0.1，0.5，1.0gkg－1枸杞多糖的飼料。每天投喂2次，每次投喂量為試驗(yàn)魚(yú)質(zhì)量的2%。飼喂60d后，Ctrl組及LBPCtrl
7、組腹腔注射橄欖油，CCl4組及加藥處理組經(jīng)腹腔注射含30%CCl4的橄欖油，每10g魚(yú)注射0.05mL，注射72h后采肝組織及血樣?！ ?．2．3樣品處理 (1)制備血清。所有試驗(yàn)魚(yú)經(jīng)尾部靜脈采血后，血樣于5000rmin－1離心5min，收集血清，－20℃儲(chǔ)藏備用，測(cè)定TP、GOT、GPT、LDH、Alb等生化指標(biāo)?！ ?2)制備肝組織勻漿。采血后試驗(yàn)魚(yú)解剖取肝，置于預(yù)冷生理鹽水中漂洗，濾紙拭干后按肝重∶生理鹽水體積=1∶9的比例加入生理鹽水后勻漿研磨，3000rmin－1離心10m
