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1、美洲南瓜裸仁基因的AFLP和SCAR分子標記分析第42卷第7期2011年7月東北農(nóng)業(yè)大學JournalofNortheastAgriculturalUniversity42(7):67-71July2011美洲南瓜裸仁基因的AFLP和SCAR分子標記分析李智媛,屈淑平,崔崇士(東北農(nóng)業(yè)大學園藝學院,哈爾濱150o30)摘要:以美洲南瓜有殼品系"金輝二號一2"和無殼品系"0516—2"進行雜交,獲得193個F2單株作為作圖群體,利用AFIP分子標記技術(shù)和集群分析法(BsA)對與美洲南瓜裸仁基因連鎖的分子標記進行研究.結(jié)果表
2、明,找到了與裸仁基因n連鎖的4個AFLP標記:E19M60一C,E22M48一B,E13M60一A和E25M51一D,連鎖遺傳距離分別為8.9,14.1,17.5和l8.8cM.同時將E19M60一C轉(zhuǎn)化為操作簡便,表現(xiàn)穩(wěn)定的SCAR標記,用于美洲南瓜的分子標記輔助育種.關(guān)鍵詞:美洲南瓜;裸仁基因n;AFLP;SCAR中圖分類號:$642.1;Q75文獻標志碼:A文章編號:1005—9369(2011)07—0067—05DevelopmentofAFLPandSCARmarkerslinkedtohull-lessng
3、eneinpumpkin(CucurbitapepoL.)ILlZhiyuan,QUShuping,CUIChongshi(CollegeofHorticulture,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030.China)Abstract:ApopulationofpumpkinF2generationincluding193individualplantswasderivedfr0mthecrossingbetweenhulllineJinhui2—2andhullles
4、sline0516?2inthisstudy.AFLPandbulkedsegragantanalyses(BSA)wereusedtoidentifymolecularmarkerslinkedtohull-lesstraitsinF2population.FourAFLPmarkersweredeveloped.ThegeneticdistanceamongfourAFLPmarkersE19M60-C,E22M48-B,E13M60-A,E25M51-Dandhull—lessseedgenewere8.9,14.
5、1,17.5and18.8cM,respectively.AndE19M60一CwasalsosuccessfullyconvertedintoaSCARmarker.Keywords:Cucurbitapepo;hull-lessngene;AFLP;SCAR南瓜屬作物的種子屬于雙子葉無胚乳型種子,由種皮和胚組成.根據(jù)南瓜種子種皮的結(jié)構(gòu)特點,將南瓜分為有殼南瓜種子和無殼南瓜種子,常見的南瓜為有殼南瓜,而無殼南瓜又稱裸仁南瓜,它是在有殼南瓜中發(fā)現(xiàn)的突變體,種殼在發(fā)育過程中退化為薄薄的一層膜,目前在美洲南瓜和中國南瓜中均存
6、在無殼突變種㈣.控制美洲南瓜裸仁性狀的基因為隱性基因凡,控制中國南瓜裸仁性狀的基因為隱性基因n一2嘲.無殼南瓜種皮退化,種仁裸露,可以直接加工食品和食用,免去了脫皮的加工工序和加工損失,降低加工成本,出仁率高,營養(yǎng)豐富,是一種優(yōu)異的南瓜種質(zhì)資源同.鑒定和克南瓜裸仁基因?qū)τ谀瞎嫌N具有重要理論和實踐意義.本試驗中利用AFLP技術(shù)篩選與裸仁基因凡緊密連鎖的分子標記,為建立裸仁性狀的分子標記輔助育種,開展裸仁南瓜育種提供技術(shù)基礎(chǔ).1材料與方法1.1植物材料及基因組DNA的準備以有殼品系"金輝二號一2"為母本,無殼品系"0516
7、—2"為父本配制正反交組合,F.與無殼親本進行回交,F代自交獲得F2代種子.2008年春季,在收稿13期:2Oll—Ol一11基金項目:東北農(nóng)業(yè)大學科技創(chuàng)新團隊項目作者簡介:李智嬡(1982一),女,碩士研究生,研究方向為分子遺傳育種.E-mall:zhiyuannaiC/~ahoo.e0m-cn通訊作者:屈淑平,副教授,研究方向為蔬菜分子遺傳育種.E-mail:qushuping@8ohu.c0m68.東北農(nóng)業(yè)大學第42卷東北農(nóng)業(yè)大學試驗實習基地種植親本,F.,Fz及回交世代.對F代和回交世代進行性狀分離調(diào)查,統(tǒng)計分離
8、比率.父母本及各世代材料幼葉在液氮中冷凍,一80℃保存,DNA的提取采用CTAB微量法提取用.1-2AFLP反應(yīng)程序1.2.1酶切一連接采用EcoRI和MseI對基因組DNA進行雙酶切,酶切一連接一步進行,預擴引物為E00和MOO組合,選擇性擴增采用E+2,~I+3引物組合.在總體積25的酶切一連接體系中EcoRI(
