檢驗還原性糖、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)

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1、實驗三、檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)生本1201班劉艷芝教學(xué)設(shè)計一、教學(xué)目標(biāo)知識目標(biāo)：闡明實驗原理—顏色反應(yīng)，識記和區(qū)分用于可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的試劑及產(chǎn)生的特定顏色，初步掌握鑒定上述化合物的基本方法，學(xué)會描述實驗現(xiàn)象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。能力目標(biāo)：培養(yǎng)學(xué)生主動獲取知識，應(yīng)用知識分析現(xiàn)象，歸納總結(jié)的能力，培養(yǎng)學(xué)生實際操作的能力及從現(xiàn)象出發(fā)探求事物本質(zhì)的能力。情感與價值目標(biāo)：通過親手實驗體驗嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度，培養(yǎng)實事求是的世界觀。二、教學(xué)重點：掌握檢測生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。三、教學(xué)難點：實驗內(nèi)容較多，實驗時間長，必須

2、周密安排，才能按時完成。學(xué)生要分工合作、教師指導(dǎo)演示。四、材料用具：實驗材料：葡萄糖液、蘋果組織液，植物油滴、浸泡過的花生種子或新鮮的花生種子，雞蛋蛋白稀釋液、黃豆組織液。實驗材料的選擇：（1）可溶性還原糖的鑒定實驗：生物組織中的糖類有還原糖和非還原糖兩類。常見的還原糖有葡萄糖、果糖和麥芽糖；蔗糖（甘蔗莖、甜菜的塊根等）、淀粉（馬鈴薯、番薯的塊莖等）是非還原糖。本實驗最理想的實驗材料是還原糖含量較高的植物組織，而且要求組織的顏色較淺或近于白色，如蘋果和犁的果實，也可以用白色的甘藍(lán)葉、白蘿卜替代。經(jīng)實驗比較，顏色反應(yīng)的明顯程度依次為：蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉和白蘿卜。在雙子葉植物中，

3、光合作用的主要產(chǎn)物葡萄糖形成后，合成為淀粉暫時儲存在葉子內(nèi)，因此最好不用雙子葉的葉子作為實驗的材料。有些單子葉植物，如韭菜，葉子內(nèi)雖然含有大量的可溶性還原糖，但由于葉片中葉綠素顏色較深，對于鑒定時的顏色反應(yīng)起著遮蓋作用，導(dǎo)致實驗現(xiàn)象不明顯，一般也不選用。（2）脂肪的鑒定：所用材料的要求：一，脂肪含量高；二，大小適宜做徒手切片?；ㄉN子符合上述要求，故選用花生種子。實驗前要將花生種子浸泡3~4h，有利于切成薄片，但浸泡時間也不宜過長，否則組織太軟，切下的薄片不易成形。（3）蛋白質(zhì)的鑒定：實驗材料最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織(或器官)，植物材料常用的是大豆種子，動物材料常用的是雞蛋

4、(卵白)。如用大豆種子，應(yīng)當(dāng)提前浸泡并研磨成漿。若用雞蛋清，應(yīng)按要求進(jìn)行稀釋，否則影響實驗效果，而且實驗后易粘住試管壁不易洗刷。儀器：徒手切片刀，試管架，試管夾，大小燒杯，小量筒，滴管，酒精燈，三腳架，石棉網(wǎng)，火柴，載玻片，蓋玻片，毛筆，吸水紙，顯微鏡。試劑：斐林試劑，蘇丹Ⅲ染液或蘇丹Ⅳ染液，雙縮脲試劑A、雙縮脲試劑B，體積分?jǐn)?shù)為50％的酒精溶液，蒸餾水。五、教學(xué)過程：（一）實驗原理：還原糖的鑒定原理：生物組織中普遍存在的還原糖，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性化學(xué)基團(tuán)（游離醛基或游離酮基等），因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有還原性化學(xué)基團(tuán)，因此叫做非還原

5、性糖，不具有還原性。用斐林試劑只能檢驗生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒定非還原性糖。斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1g／mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g／mL的硫酸銅溶液等體積混合配制而成。二者混合后，立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與葡萄糖在水浴加熱的條件下，發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式如下：CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍(lán)色→棕色→磚紅色(沉淀)。脂肪的鑒定原理：脂肪可以

6、被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色：蘇丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大，當(dāng)用蘇丹Ⅲ的酒精溶液處理含有脂肪的生物組織時，酒精中的蘇丹Ⅲ進(jìn)入脂肪中，將脂肪染成橘黃色。脂肪也能夠被蘇丹Ⅳ染液染成橘紅色。蛋白質(zhì)的鑒定原理：鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時，常用雙縮脲試劑進(jìn)行檢測和鑒定。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1g／mL的氫氧化鈉溶液（雙縮脲試劑A）和質(zhì)量濃度為0.01g／mL的硫酸銅溶液（雙縮脲試劑B）。在堿性溶液(NaOH)中，蛋白質(zhì)能與Cu2+作用，形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物，從而使待測溶液呈紫色。淀粉的鑒定原理：淀粉溶液遇碘變藍(lán)。（二）操作指導(dǎo)：1.實驗成功的關(guān)鍵在于實驗材料的選

7、擇。[1]在做可溶性還原糖的鑒定實驗中，最理想的實驗材料是含還原糖糖量較高，且組織的顏色較淺（最好是白色或近于白色）的植物組織。否則，材料自身顏色對實驗過程中顏色變化的的觀察會產(chǎn)生掩蓋，而不利于觀察。[2]在做脂肪的鑒定實驗中，我們選用富含脂肪的花生種子做實驗材料。做徒手切片時，提醒學(xué)生注意安全，切片要求薄且平整。[3]在蛋白質(zhì)的實驗時，選用富含蛋白質(zhì)的生物組織，植物材料常用的是大豆，動物材料常用的是雞蛋。[4]做鑒定還原糖和蛋白質(zhì)的實驗前，可以留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏色做比較