酒石酸銻鉀對(duì)人胃癌細(xì)胞體外增殖和凋亡的影響論文

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1、酒石酸銻鉀對(duì)人胃癌細(xì)胞體外增殖和凋亡的影響論文徐少勇,郭光云,王家寧,黃永章【關(guān)鍵詞】胃腫瘤【Abstract】AIM:Toexplorethetherapeuticeffectsofantimonialsonsolidtumorbyobservingtheeffectsofpotassiumantimonyltartrate(PAT)ontheproliferationandapoptosisofhumangastriccancerSGC7901cellsinvitro.METHODS:MTTmethodeasurethelevelsoft

2、heproliferationofSGC7901cellsintervenedetry.RESULTS:PATinhibitedSGC7901cellgroedependentmanner.PATdisplayedprominentinhibitoryeffectsol/Lat72hours,andthegroatincondensationandnuclearfragmentationicroscopeinthecellsstainedol/LPATat48hours,reaching35.2%.paredonypotassiumtartr

3、ate;stomachneoplasms;celldivision;apoptosis【摘要】目的:通過(guò)觀察酒石酸銻鉀(PAT)在體外對(duì)人胃癌SGC7901細(xì)胞增殖和凋亡的影響,探討重金屬銻劑對(duì)實(shí)體瘤的治療作用,為PAT用于臨床治療胃癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及理論基礎(chǔ).方法:采用MTT法檢測(cè)不同濃度PAT對(duì)人胃癌SGC7901細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖的影響;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和Hoechst33258染色后熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡.結(jié)果:5,10,20,40μmol/LPAT能明顯抑制胃癌細(xì)胞增殖,抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴性.20,40μmol/LPAT作用72h細(xì)胞

4、的生長(zhǎng)抑制率分別是54.1%和66.6%;Hoechst33258染色顯示PAT作用后,細(xì)胞核出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變;流式細(xì)胞儀檢測(cè)到凋亡峰.freelol/L作用48h最大,達(dá)35.2%.同時(shí)G2/M期細(xì)胞明顯增多,以對(duì)照組的5.4%,增至24.6%.結(jié)論:PAT能抑制SGC7901細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡.【關(guān)鍵詞】酒石酸銻鉀;胃腫瘤;細(xì)胞分裂;脫噬作用0引言胃癌晚期預(yù)后差,長(zhǎng)期存活率低[1,2],5a生存率僅15%~25%[3].大多數(shù)胃癌患者診斷時(shí)已到進(jìn)展期,需接受化療,但常規(guī)化療藥物的效果不理想.因此,尋找新的藥物有重要臨床意義.最

5、近的研究發(fā)現(xiàn)微摩爾濃度的銻劑[酒石酸銻鉀(potassiumantimonyltartrate,PAT)、三氧化二銻]能顯著抑制白血病細(xì)胞、惡性B淋巴細(xì)胞生長(zhǎng),而對(duì)正常的淋巴細(xì)胞無(wú)影響,被認(rèn)為是一個(gè)潛在的、有價(jià)值的治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤的藥物[4-7].但銻劑對(duì)其他實(shí)體瘤細(xì)胞的作用尚不清楚.我們選用不同濃度的酒石酸銻鉀作用于人胃癌SGC7901細(xì)胞,觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.1材料和方法1.1材料PAT購(gòu)自SigmaAdrich公司,用三蒸水配制成1×10-2mol/L儲(chǔ)存液.使用時(shí)用RPMI1640培養(yǎng)基配成工作濃度;Hoechst3

6、3258,.freela公司;四甲基偶氮唑鹽(MTT)購(gòu)自北京華美公司;RPMI1640培養(yǎng)基、小牛血清購(gòu)自Gibco公司;使用OlympusBX51熒光顯微鏡∑960酶標(biāo)儀CoulterEpicsXL流式細(xì)胞儀.SGC7901人胃癌細(xì)胞株購(gòu)自中科院上海細(xì)胞生物所.用RPMI1640培養(yǎng)液(含100mL/L小牛血清,100ku/L青霉素和鏈霉素)37℃,50mL/L的CO2孵箱中常規(guī)培養(yǎng).1.2方法1.2.1MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用2.5g/L胰蛋白酶消化成單細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞密度為3×107/L,接種于96孔培養(yǎng)板,每孔加20

7、0μL的細(xì)胞懸液,細(xì)胞培養(yǎng)24h貼壁后,加入PAT.設(shè)陰性對(duì)照組和不同濃度PAT實(shí)驗(yàn)組(5,10,20,40μmol/L).每組均設(shè)立4個(gè)復(fù)孔.培養(yǎng)24,48,72h每孔加入5g/LMTT(PBS配制)20μL再培養(yǎng)4h,吸棄上清,加入DMSO200μL,震蕩10min.于酶標(biāo)儀490nm處測(cè)量吸光度A值.上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取其均值.計(jì)算細(xì)胞增殖的抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組A值)/對(duì)照組A值×100%.1.2.2Hoechst33258染色觀察細(xì)胞核變化取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以2×109/L密度接種于含消毒蓋玻片的6孔板中,培養(yǎng)24h細(xì)胞貼壁后加入上

8、述濃度的PAT.24,48h后吸盡培養(yǎng)液,加入固定液(甲醇V∶冰醋酸V=3∶1)0.5mL,固定10min,去固定液,用PBS洗2遍.加入5mg/LHoechst3

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