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《通絡(luò)救腦口服液對ad大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及nnos、ss表達的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、通絡(luò)救腦口服液對AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及nNOS、SS表達的影響論文董海影，張春慶，宮國良，張曉杰【摘要】目的觀察通絡(luò)救腦口服液對β-淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)誘導(dǎo)的AD大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用及對神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)、生長抑素(Somatostatin,SS)蛋白表達的影響。方法采用大鼠海馬立體定向注射凝聚態(tài)Aβ1-40誘導(dǎo)老年性癡呆(Alzheimer’sdisease,AD)動物模型。采用Morris水迷宮測試大鼠尋找平臺所需時間和通過原平臺次數(shù)評價大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及通絡(luò)救腦口服液干預(yù)作用。采用免疫組織化學(xué)染色
2、法和計算機圖像分析技術(shù)測定海馬區(qū)nNOS、SS蛋白陽性目標(biāo)積分光密度。結(jié)果與假手術(shù)組比較，模型組平均逃避潛伏期顯著延長，跨越原平臺位置次數(shù)明顯減少(均為P0.01);與模型組比較，通絡(luò)救腦口服液組(12，24.freelg·kg-1·d-1)平均逃避潛伏期顯著縮短，跨越原平臺位置次數(shù)明顯增加(P0.01)。免疫組化實驗結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬區(qū)nNOS、SS蛋白表達明顯降低(P0.05);與模型組比較，通絡(luò)救腦口服液各劑量組nNOS、SS蛋白表達顯著升高(P0.05)。結(jié)論通絡(luò)救腦口服液通過上調(diào)nNOS、SS蛋白表達水平
3、，從而發(fā)揮其抗老年性癡呆的作用?！娟P(guān)鍵詞】阿爾茨海默氏病;通絡(luò)救腦口服液;神經(jīng)元型一氧化氮合酶;生長抑素阿爾茨海默氏病(Alzheimer’sdisease,AD)發(fā)現(xiàn)至今已百年，但由于其病因不完全明確，迄今尚無有效的防治藥物。就目前的進展來看，有關(guān)防治的藥物研究主要還是延緩患者的死亡、部分阻止或延緩疾病的發(fā)作和改善患者的生活質(zhì)量，并提倡多因素、個性化治療1，2。傳統(tǒng)中藥不但成本低廉，且可作用于多靶點，毒副作用小，具有其獨特的優(yōu)勢。因此，結(jié)合AD的病因研究，在傳統(tǒng)中藥中尋找防治的有效藥物成分是十分有意義的嘗試。本研究采用海馬立體定向注射
4、Aβ1-40方法建立大鼠AD模型，并用通絡(luò)救腦口服液(TLJNOralSolution)灌胃進行藥物干預(yù)，觀察TLJN對AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及nNOS、SS蛋白表達的影響，以探討TLJN對AD可能的防治作用。1材料與儀器1.1藥物與試劑通絡(luò)救腦口服液，由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院制備。鹽酸多奈哌齊片由法國PFIZERPGM公司制造，產(chǎn)品批號5136903。Aβ1-40為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。Aβ1-40使用前用無菌生理鹽水稀釋成10μg·μl-1，37℃孵育1周，使其變?yōu)榫奂癄顟B(tài)的Aβ。RabbitAnti-SS、RabbitA
5、nti-nNOS及SABC即用型試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)。DAB顯色試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)。1.2動物與分組140只SD雄性大鼠，鼠齡8～12周，體質(zhì)量(280±10)g，購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證編號SCXK(京)2002-0003。經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機分為7組：空白對照組、假手術(shù)組、模型組、鹽酸多奈哌齊組和TLJN的3個劑量組(12，24，48mg·kg-1·d-1)，每組20只。1.3儀器MORRIS水迷宮系統(tǒng)(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)，江灣Ⅰ型C立體定向器(第二軍醫(yī)大學(xué))。2方法
6、2.1動物模型的制作實驗大鼠1%戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉后，立體定向儀固定頭部，備皮消毒，沿顱頂中線作2cm切口，分離骨膜暴露頭骨，于前囟向后3.0mm，中線左右各旁開2.2mm，用牙科鉆打開顱骨，垂直進微量進樣器針2.8mm，將1μl溶液緩慢注入，注射時間為5mm，留針5min，模型組、鹽酸多奈哌齊組、通路救腦口服液各劑量組左右側(cè)海馬各注射1μlAβ1-40(10μg)溶液，假手術(shù)組注射1μl生理鹽水。2.2給藥方法造模后3d開始給藥，鹽酸多奈哌齊組按0.33mg·kg-1·d-1，各通絡(luò)救腦口服液組按12，24，48mg·k
7、g-1·d-1給藥，1次/d灌胃，其余3組給等體積生理鹽水，共4周。2.3學(xué)習(xí)記憶能力的測定給藥后進行Morris水迷宮行為測試。水迷宮為一不銹鋼圓形水池(內(nèi)壁貼上了黑色膠膜)，直徑150cm，高60cm，內(nèi)置有機玻璃平臺(外貼黑色膠膜)，平臺高40cm，底面為6cm×10cm。在水池壁東、西、南、北部位分別標(biāo)明入水點。將平臺放在西南象限正中距池壁22cm處，水溫(22±1)℃。訓(xùn)練期間環(huán)境安靜，迷宮外參照物不變。Morris水迷宮實驗前5天為定位航行試驗(placenavigationtest)，每天從東入水點頭朝池壁將大鼠放入水池，
8、使其自由游泳，自動攝像系統(tǒng)記錄大鼠尋找平臺的時間(逃避潛伏期，escapelatency)，設(shè)定60s為最長逃避潛伏期，60s后自動停止記錄。實驗第6天為空間探索試驗(spatialprobetest)。定
