蛇床子素對(duì)ad大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及機(jī)制研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文蛇床子素對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及機(jī)制研究姓名：董曉華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：張丹參201204中文摘要蛇床子素對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及機(jī)制研究摘要阿爾茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是發(fā)生于老年期和老年前期的一種以進(jìn)行性癡呆為特征的腦慢性退行性疾病，臨床主要表現(xiàn)為記憶力減退、智能障礙及行為情緒等的異常改變。統(tǒng)計(jì)表明，65歲左右的老年人中AD發(fā)病率為10％，85歲以上的老年人中發(fā)病率為47％，AD患者的存活期預(yù)計(jì)可達(dá)到20年，但大多數(shù)病例在確診后僅能存活8～10年，它已經(jīng)成為人

2、類的第四號(hào)殺手。隨著人口老齡化進(jìn)程加快，開發(fā)對(duì)AD有效的干預(yù)措施和治療藥物已成為AD研究的熱點(diǎn)，也是一個(gè)倍受關(guān)注的社會(huì)問(wèn)題。AD的發(fā)病機(jī)制一般包括膽堿功能降低，氧化應(yīng)激，淀粉樣肽的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，炎癥介質(zhì)，甾體類激素減少。另外興奮性毒性、細(xì)胞凋亡fapoptosis)、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)異常也與AD關(guān)系密切。神經(jīng)生化學(xué)揭示中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)與學(xué)習(xí)和記憶密切相關(guān)，Asp和Glu屬于興奮性氨基酸，Gly和GABA屬于抑制性氨基酸，它們對(duì)維持神經(jīng)系統(tǒng)的興奮和抑制平衡起重要作用。AD時(shí)中樞各種氨基酸水平發(fā)生變化，尤其Glu和GABA間的平衡被破壞，是導(dǎo)致神經(jīng)

3、元損傷的關(guān)鍵因素。細(xì)胞凋亡是AD發(fā)生神經(jīng)元退行性死亡的重要途徑，因此干擾細(xì)胞凋亡可能成為治療AD新方法。細(xì)胞凋亡受多種基因的調(diào)控，Bcl．2基因家族是很重要的調(diào)控基因，包括眾多成員，其中Bax在凋亡中起促進(jìn)作用，Bcl．2則拮抗細(xì)胞凋亡。Bcl．2／Bax組成一個(gè)平衡體系，Bax過(guò)剩細(xì)胞凋亡加速，Bcl．2過(guò)多則細(xì)胞凋亡被抑制。近年來(lái)，隨著對(duì)細(xì)胞周期及其調(diào)控研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)AD發(fā)病機(jī)制與細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)，提出了AD發(fā)病機(jī)制細(xì)胞周期假說(shuō)：一旦細(xì)胞周期調(diào)控的某一環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常，成年人中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元可再次進(jìn)入細(xì)胞周期，但處在有絲分裂末

4、期企圖重新進(jìn)入細(xì)胞周期的神經(jīng)元將出現(xiàn)細(xì)胞周期停滯，最終形成AD某種病理特征或神經(jīng)元凋亡。蛇床子素(osthole，Ost)，7．甲氧基．8．異戊烯基．香豆素，傳統(tǒng)中藥蛇床子的組成成分，具有多種的藥理作用，包括抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗血小板、雌激素樣和抗疼痛等作用，目前己在臨床上用于治療皮膚病和性病多年。我們多年來(lái)一直從事蛇床子素改善學(xué)習(xí)記憶，抗衰老的研究，目中文摘要前研究表明蛇床子素能通過(guò)抑制腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，ACHE)活性、增強(qiáng)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH

5、—PX)和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性而清除氧自由基(oxygenfreeradical，0FR)，改善癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙，且毒副作用小，能透過(guò)血腦屏障(blood．brainbarrier，BBB)，有望成為預(yù)防和治療AD的有效藥物?；谝陨涎芯勘尘埃狙芯坎捎眯袨閷W(xué)實(shí)驗(yàn)和電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法，研究蛇床子素對(duì)Ap25．35誘導(dǎo)AD大鼠認(rèn)知障礙及中樞可塑性的影響；采用柱前衍生化高效液相色譜紫外檢測(cè)法研究蛇床子素對(duì)Ap25．35誘導(dǎo)的AD大鼠海馬中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)水平變化：采用HE染色、TUNEL染

6、色、免疫組織化學(xué)染色方法和流式細(xì)胞技術(shù)研究蛇床子素對(duì)Ap25．35誘導(dǎo)的AD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)及細(xì)胞周期的影響。具體內(nèi)容如下：1蛇床子素對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響目的：采用一次性側(cè)腦室注射聚集態(tài)Ap25-35建立AD大鼠模型，并以不同劑量的蛇床子素進(jìn)行干預(yù)，觀察蛇床子素對(duì)AD模型大鼠認(rèn)知障礙的影響。方法：SD大鼠隨機(jī)分4組：生理鹽水對(duì)照組(controlgroup)，模型組(modelgroup)，蛇床子素12．5mg·kg。組(Ostlgroup)，．蛇床子素25．0mg·kg。1坌H(Ost2group)。實(shí)驗(yàn)d1，模型

7、組和蛇床子素組大鼠側(cè)腦室注射聚集態(tài)Ap25．35建立AD大鼠模型，對(duì)照組大鼠注射生理鹽水。造模后對(duì)照組和模型組大鼠腹腔注射(peritonealinjection，ip)溶劑lmL·kg‘，蛇床子素組大鼠分別給予不同劑量蛇床子素，所有動(dòng)物都連續(xù)給藥14d。造模后d10．d14進(jìn)行Morris水迷宮(morriswatermaze，MWM)實(shí)驗(yàn)，大鼠訓(xùn)練4d(d1．d4)，記錄動(dòng)物找到站臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)。最后一天訓(xùn)練后24h(d5)，移走站臺(tái)進(jìn)行測(cè)試實(shí)驗(yàn)，記錄大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間和穿過(guò)站臺(tái)位點(diǎn)的次數(shù)。結(jié)果：隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，各實(shí)驗(yàn)組

8、潛伏期均不斷縮短；d1各組間潛伏期相比無(wú)差異；模型組與對(duì)照組相比，潛伏期從實(shí)驗(yàn)d2起延長(zhǎng)，目標(biāo)象限搜尋時(shí)間百分率和穿過(guò)站臺(tái)次數(shù)減少；蛇床子素組與模型組相比，d2起潛伏期明顯縮短，