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《松材線蟲、松墨天牛和松樹間的共生關(guān)系研究研究生課程論文大學(xué)論文.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、得分：_______南京林業(yè)大學(xué)研究生課程論文2015～20016學(xué)年第二學(xué)期課程號：課程名稱：論文題目：學(xué)科專業(yè)：森林保護學(xué)號：3150462姓名：王立超任課教師：黃麟二○一六年六月內(nèi)容本文研究松材線蟲、松墨天牛和真菌在松樹中的共生關(guān)系實驗材料和方法：（1）真菌小長喙霉在PDA平板上、25℃條件下培養(yǎng)一周，使用前在5℃條件下保存?；移咸焰咴?0mL的大麥籽粒上培養(yǎng)。（2）線蟲強毒蟲株松材線蟲T-4在25℃條件下在灰葡萄孢上培養(yǎng)，使用前在5℃條件下保存。松材線蟲懸濁液包括成蟲和幼蟲，懸濁液濃度為50000條/mL。（3）昆蟲松墨天牛在恒定條件下培養(yǎng)（2
2、5℃，16h光照、8h黑暗），讓其繁殖10代，第七代到第十代成蟲用來在赤松小苗上產(chǎn)卵，收集天牛所產(chǎn)的卵并將其放置在濕紙巾上，在一天之內(nèi)孵化的幼蟲用于實驗。（4）松枝2014年六月采伐兩顆12年生（胸徑分別為3.9和5.2cm）的赤松和兩顆12年生的黑松（胸徑分別為8.1和9.0cm），分別在實驗1和實驗3中使用。2015年二月采伐3顆12年生的赤松用于實驗2，胸徑分別為7.4、7.6和8.4cm，2014年十月采伐一顆12年生的赤松用于實驗4，其胸徑為6.8cm。樹枝截為15cm一段，在樹枝的兩端用石蠟密封起來，每個實驗組樹枝的樹木特定的每組樹枝之間不
3、存在顯著差異(5)接種使用鑿子和鑷子在離樹端13.7mm處從木質(zhì)部分離樹皮（面積22.3mm×17.3mm），用刻刀在漏出的木質(zhì)部中間挖一個直徑6-7mm圓形刻槽用以放置松墨天牛幼蟲，一份帶有灰葡萄孢或則沒有灰葡萄孢的面積為5×5mm的PDA培養(yǎng)基放置在遠離樹端、接近圓形刻槽的位置。用到劃長16.8mm、最大寬度為14.3mm的三角形裂口，在漏出的韌皮部接種20uL的線蟲懸濁液（1000條線蟲）或者是無菌純凈水。兩個樹皮傷口最小距離平均為13.7mm，兩個傷口接種后覆蓋原來的樹皮，用封口膜包起來，即使不接種松墨天牛幼蟲，也挖一個小刻槽，實驗4中松樹枝條
4、不用接種松材線蟲懸液或水，不會在樹皮上形成傾斜傷口。實驗一、為了確定松墨天牛幼蟲和小長喙霉對松材線蟲種群生長的影響，一組赤松枝條接種松材線蟲、松墨天牛和小喙長霉。第二組枝條接種松材線蟲、松墨天牛和PDA，第三組枝條接種松材線蟲和小喙長霉，第四組枝條接種松材線蟲和PDA。他們被垂直放置使線蟲遠離容器底部。25℃，16h光照、8h黑暗，相對濕度100%條件下常溫培養(yǎng)，用純凈水保持濕度。接種18天后，從松枝上剝離樹皮，從枝條上取幼蟲和幼蟲糞便，記錄韌皮部和木質(zhì)部上藍變面積確定小喙長霉的繁殖情況，從縱向韌皮部上剝離四份之一到二分之一的樹皮，將樹皮外層剝離，收集
5、里面樹皮以獲得韌皮部樣品，再將里層樹皮的韌皮部剪切為1-2mm大小的樹皮塊，使用一把15mm寬的刀片，從接種松墨天牛幼苗和松材線蟲的地方包括髓取木質(zhì)部樣品，記錄木質(zhì)部樣品真菌繁殖情況，糞便、韌皮部和木質(zhì)部分別在25℃下使用貝爾曼漏斗法分離48-72h，計算分離線蟲濃度，材料在60℃下烘5-12d，稱重，線蟲密度表示每克材料干重中松材線蟲的數(shù)量。分別使用電子天平和游標(biāo)卡尺測量幼蟲體重和頭殼寬度，分別精確到0.1mg和0.05mm，根據(jù)頭殼寬度確定幼蟲齡期：0.585–1.170,1.260–1.935,1.980–3.150和3.150–4.365mm分
6、別為一齡、二齡、三齡和四齡蟲。實驗二、確定赤松中韌皮部、木質(zhì)部和天牛幼蟲蛀屑線蟲密度的不同，在2015年2月26日將剛孵化的幼蟲、1000條松材線蟲和一份接有小長喙霉的PDA接種在10條直徑相似的上述赤松枝條上，2015年3月26日分別將韌皮部、木質(zhì)部和幼蟲蛀屑用以分離線蟲，確定線蟲密度，實驗三、確定松材線蟲種群和小喙長霉對松墨天牛生長發(fā)育的影響，四組黑松枝條接種松材線蟲、松墨天牛和小喙長霉三個物種組成的四種組合。方法和實驗一方法相同，培養(yǎng)條件相同。每天觀察松枝，記錄松墨天牛羽化情況，分性別記錄成蟲數(shù)量，體重和鞘翅長分別精確到0.1mg和0.05mm。
7、沒有松墨天牛出現(xiàn)的松枝在接種153-164d后分離，稱量幼蟲的鮮重和記錄頭寬、顏色、腸內(nèi)排泄物的有無以及幼蟲所在的位置。實驗四、為確定松墨天牛幼蟲對小喙長霉繁殖的影響，6個赤松枝條接種小喙長霉和松墨天牛幼蟲，接種22d后，剝離松枝樹皮，幼蟲蛀屑和幼蟲取樣，測量幼蟲體重和頭殼寬度文章結(jié)構(gòu)摘要關(guān)鍵詞前言材料與方法真菌線蟲傳播媒介松樹枝條接種方法實驗一實驗二實驗三實驗四數(shù)據(jù)分析結(jié)果赤松枝條中松墨天牛幼蟲和小喙長霉菌對松材線蟲種群的影響（實驗一）松墨天牛幼蟲的糞便中高密度松材線蟲的再現(xiàn)（實驗二）黑松枝條中松材線蟲和小喙長霉菌對松墨天牛生長發(fā)育的影響（實驗三）赤
8、松枝條中松墨天牛幼蟲對小喙長霉菌的影響（實驗四）討論參考文獻設(shè)計思路實驗一為研究赤松枝條中松墨
