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1、何首烏生品與炮制品薄層層析鑒別方法研究論文.freelethodfordistinguishingthecrudeandprocessedRadixofPolygonummultiflorumThunb.byTLC.MethodsSomeofthesamplesdifferentcitiesinChina,someofthemacopoeiastandardorlocalstandard.TLCconditions：5-hydroxymethyl-furfural(5-HMF)atterether(60～
2、90℃)-ethylacetate(1∶1)onasilicaGthinlayerplate,sprayedatogramshomultiflorumThunb.ethodfordistinguishingthecrudeandprocessedPolygonummultiflorumThunb.multiflorumThunb.；TLC；5-hydroxymethyl-furfural何首烏為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb.的干燥塊根,經(jīng)炮制后為制何首烏。2005年版《
3、中華人民共和國藥典》(一部)1對何首烏生品與炮制品采用了相同的薄層層析(TLC)鑒別方法,鑒別的對象為何首烏對照藥材,也沒有涉及具體的化學成分,故而采用TLC鑒別方法無法區(qū)別何首烏生品與炮制品。前期研究發(fā)現(xiàn),何首烏炮制后HPLC圖譜顯示有新的色譜峰出現(xiàn)2,經(jīng)提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定,確定新產(chǎn)生的成分之一為5-羥甲基糠醛(5-HMF)3。本試驗以5-HMF為對照品,對采用TLC鑒別方法區(qū)別何首烏生品與炮制品的方法進行了研究。1材料薄層掃描成像系統(tǒng)(GEL2020D)。5-HMF為本實驗室從制何首烏中提取分離得到(
4、純度98%以上)。采集或采購的何首烏與制何首烏樣品來自安徽巢湖、湖北恩施、廣西桂林、山東榮成、北京同仁堂、湖南瀏陽、江西九江、廣東德慶、山東泰山、福建福田。實驗室炮制的何首烏藥材采集于廣東德慶縣德城鎮(zhèn)家種品,加工制成何首烏生品,然后依據(jù)《中華人民共和國藥典》制備黑豆汁蒸、黑豆汁燉和清蒸的制何首烏樣品1,另依據(jù)地方炮制標準制備黑豆汁高壓蒸的制何首烏樣品4。不同炮制時間制何首烏樣品為采用《中華人民共和國藥典》黑豆汁燉法制備8、16、24、32、40h的樣品。硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠),乙醇、石油醚(6
5、0～90℃)、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、磷鉬酸、α-萘酚均為分析純(北京化學試劑公司)。2方法與結(jié)果2.1對照品溶液制備取5-HMF對照品,加乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作為對照品溶液。2.2供試品溶液制備分別取何首烏生品和炮制品粉末(過4號篩)4g,加乙醇40mL,超聲處理40min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水5mL使溶解,過聚酰胺柱(1g,內(nèi)徑10～15mm),用水25mL洗脫,收集洗脫液,40℃以下減壓蒸干,殘渣加乙醇1mL使溶解,作為供試品溶液。2.3薄層層析條件依2005年版《中華人民共和國藥
6、典》(一部)薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗,吸取供試品溶液和對照品溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。噴以15%α-萘酚乙醇溶液,在90℃加熱至斑點顯色清晰,日光下檢視。不同炮制方法、相同炮制方法不同炮制時間、不同地區(qū)制何首烏色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同的紫紅色斑點,何首烏生品色譜都沒有顯示相同顏色的斑點。結(jié)果見圖1～圖3。3討論由于缺乏統(tǒng)一的炮制規(guī)范,全國各省市何首烏炮制方法有多種,有黑豆汁蒸、黑豆汁燉和清蒸,還有高
7、壓蒸4等,炮制時間由3h到40h不等。不同炮制方法TLC圖譜結(jié)果顯示,采用黑豆汁蒸、黑豆汁燉和清蒸以及高壓蒸法制備的制何首烏樣品,在與5-HMF色譜相應的位置上,都顯示相同顏色的斑點,而何首烏生品沒有顯示相同顏色的斑點(見圖1)。何首烏采用黑豆汁燉8、16、24、32、40h得到的不同炮制時間的樣品,TLC圖譜結(jié)果顯示,與5-HMF色譜相應的位置上,都顯示相同顏色的斑點,并且隨炮制時間延長,在點樣量相同的情況下,斑點的大小逐漸增大(見圖2),表明制何首烏中的5-HMF含量隨炮制時間延長逐漸升高,與HPLC
8、含量測定的結(jié)果一致(結(jié)果另文報道)。不同地區(qū)采集或采購的3個批次的何首烏生品與10個批次的制何首烏樣品TLC鑒別結(jié)果顯示,在與對照品色譜相應的位置上,制何首烏顯示相同顏色的斑點,但各批次相應斑點的大小有一定差異,表明不同地區(qū)制何首烏中5-HMF含量存在明顯差異,而3個批次的何首烏樣品在相應的位置上,沒有顯示相同顏色的斑點(見圖3)。本結(jié)果表明,所建立的TLC鑒別方法可以用于區(qū)別何首烏與制何首烏。在方法建立過程中,首先參照200
