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《褪黑素增強(qiáng)hela細(xì)胞的抗氧化作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、褪黑素增強(qiáng)HeLa細(xì)胞的抗氧化作用【摘要】目的探討褪黑素在抑制HeLa細(xì)胞增殖劑量下對(duì)抗氧化作用的影響。方法MTT法測(cè)定褪黑素對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的抑制作用;分光光度法檢測(cè)褪黑素作用下總抗氧化能力(T-AOC),測(cè)定谷胱甘肽(GSH)及總超氧化物歧化酶(T-SOD)的含量。結(jié)果褪黑素對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用存在明顯的濃度及時(shí)間依賴性;褪黑素作用72h抑制HeLa細(xì)胞增殖的IC50為0.27mmol/L;褪黑素劑量依賴性增強(qiáng)T-AOC;也增加GSH及T-SOD的含量。結(jié)論褪黑素在抑制HeLa細(xì)胞增殖劑量下可增強(qiáng)抗氧化作用?！娟P(guān)鍵詞】褪黑素;HeLa細(xì)胞;細(xì)
2、胞增殖;分光光度法,紫外線;氧化還原;腫瘤細(xì)胞,培養(yǎng)的ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheantioxidanteffectsofmelatoninonHeLacellsproliferateactivities.MethodsMTTassayelatoninonHeLacells.Ultraviolet-visiblespectrophotometerutase(T-SOD).ResultsTheanti-proliferateactivitiesofmelatoninonHeLacellse-dependentand
3、adose-dependentmanner.TheIC50ofmelatoninonHeLacellsmol/L.MelatoninenhancedtheT-AOCelatonin;HeLacells;cellproliferation;spectrophotometry,ultraviolet;oxidationreduction;tumorcells,cultured褪黑素(melatonin,MT)是一種主要由松果腺細(xì)胞合成和分泌的吲哚類激素,已有調(diào)節(jié)睡眠的MT制劑應(yīng)用于市場(chǎng)［1］。MT作為體內(nèi)的天然抑瘤因素,其抗腫瘤機(jī)制可能與直接抑制腫瘤增殖、
4、免疫增強(qiáng)作用及抗氧化作用有關(guān)［2-4］。MT毒副作用相對(duì)小,且可減少其他抗腫瘤藥的毒性［5-6］,已成為研究的熱點(diǎn)之一。本課題組對(duì)褪黑素的體內(nèi)外抗腫瘤作用研究已有報(bào)道［7-10］。筆者探討褪黑素在抑制HeLa細(xì)胞增殖劑量下對(duì)抗氧化作用的影響。1材料與方法1.1材料1.1.1主要試劑與設(shè)備MT(美國Sigma公司),臨用時(shí)先用無水乙醇溶解,再用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液稀釋成所需的濃度,無水乙醇的終濃度≤1%。RPMI1640培養(yǎng)液(美國Gibco公司)。胰蛋白酶(美國Difco公司，進(jìn)口分裝)。小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司),
5、56℃滅活30min后使用。四甲基偶氮唑鹽(MTT,美國Sigma公司)?？偪寡趸芰?T-AOC)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。紫外-可見分光光度計(jì)(752型,上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。1.1.2細(xì)胞株及培養(yǎng)條件人宮頸癌HeLa細(xì)胞(上海中國科學(xué)院細(xì)胞庫),用含10％小牛血清及800U/mL慶大霉素的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng),經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化傳代,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。1.2方法1.2.1MTT法觀察褪黑素對(duì)細(xì)胞增殖的影響取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa細(xì)胞,以0.25%胰蛋白酶充分消化后
6、,用培養(yǎng)液稀釋使細(xì)胞密度為(1.5～2.5)×104mL-1后接種于96孔培養(yǎng)板中,每孔180μL。實(shí)驗(yàn)組分為低、中、高及極高劑量組(終濃度分別為0.03,0.17,0.86及4.31mmol/L),各組每孔分別加入等體積相應(yīng)濃度的MT20μL,對(duì)照組加入等體積培養(yǎng)液,含與最高濃度藥液等體積的無水乙醇,無水乙醇最高終濃度≤1%。每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔,培養(yǎng)1～5d。藥液作用1d后開始,每天同一時(shí)間取其中一96孔板,每孔加入5mg/mLMTT20μL,在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4h后,棄凈上清液,每孔加DMSO150μL,空白對(duì)照孔加入DMSO150μL。振蕩10min
7、;用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度［D(492nm)］,計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,Bliss法計(jì)算IC50。1.2.2紫外-可見分光光度法檢測(cè)褪黑素對(duì)HeLa細(xì)胞T-AOC及T-SOD、GSH含量的影響取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa細(xì)胞,以0.25%胰蛋白酶充分消化后,用培養(yǎng)液稀釋至細(xì)胞密度為(6～10)×105mL-1后接種于6孔培養(yǎng)板中,每孔2mL。實(shí)驗(yàn)組分為低、中、高及／或極高劑量組(終濃度分別為0.17,0.86,4.31及/或21.6mmol/L)，每組設(shè)1塊6孔培養(yǎng)板,各組每孔分別加入等體積相應(yīng)濃度的MT20μL,對(duì)照組加入等體積培養(yǎng)液,含與最高濃度藥液等體積的無水乙
8、醇,無水乙醇最高終濃度≤1%。分別培養(yǎng)24,48及72h,重復(fù)3次。1.2.2.1T-AOC測(cè)
