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《瘀膽血清體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、瘀膽血清體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究論文鐘曉琳，萬(wàn)居易，王忠瓊，李昌平，胡蓮【摘要】目的探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外誘導(dǎo)其分化為肝細(xì)胞的可行性。方法分離、純化并鑒定大鼠骨髓MSCs，制備正常及瘀膽大鼠血清，取第3代MSCs分組培養(yǎng)：A組：DMEM+10%FBS;B組：肝細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(HGM)+5%FBS;C組：HGM+5%正常大鼠血清;D組：HGM+5%瘀膽大鼠血清;E組：HGM+5%瘀膽大鼠血清+25μg/LHGF。觀(guān)察各組細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn).freelRNA陽(yáng)性表達(dá)，第14，21天
2、出現(xiàn)CK18mRNA陽(yáng)性表達(dá)，D、E組上清液中白蛋白濃度隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，且E組高于D組(P0.05)。A、B、C組未見(jiàn)AFP、CK18表達(dá)及白蛋白濃度變化。結(jié)論正常大鼠血清能明顯促進(jìn)MSCs的增殖;瘀膽血清對(duì)MSCs有一定促增殖作用，且能有效誘導(dǎo)其向肝細(xì)胞分化，聯(lián)合使用HGF能提高分化率?！娟P(guān)鍵詞】瘀膽血清;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子;間充質(zhì)干細(xì)胞;肝細(xì)胞ResearchontheDifferentiationofMesenchymalStemCellsInducedbyChelestaticSerainvitrointoHepatoc
3、yteZhongXiaolin,edicalColleg,LuzhouCity,SichuanProvince646000P.R.ChinaAbstractObjectiveTodiscussthepossibilityofthedifferentiationofmesenchymalstemcells(MSCs)inducedbychelestaticserainvitrointohepatocyte.MethodsRatbonemarroalandcholestaticseraofratsedium(HGM)+5%FBS),Gr
4、oupC(HGM+5%normalratsera),GroupD(HGM+5%cholestaticratsera)andGroupE(HGM+5%cholestaticratsera+25μg/LHGF);Themorphologicchangesoftheinducedcellseasurederasechainreaction(RT-PCR)andthealbumincontentinsupernatantinedbybromocresolgreenmethod.ResultMSCspolygonalandbinuclearc
5、ellsorphologicchangesofthecellsonstratedthatthecellsinGroupCproliferatedthefastestandthoseinGroupDandGroupEproliferatedfasterthanthoseinGroupB(P0.05);thepositiveexpressionofAFPmRNARNAinconcentrationinthese2groupsincreasedalongelengthofinduction,andtheconcentrationinGro
6、upEinconcentrationchangesalratseracanobviouslypromotetheproliferationofMSCs;cholestaticseraisofcertaineffectinMSCsproliferationandcaneffectivelyinducethedifferentiationofMSCsintohepatocytes,thebinedapplicationesenchymalstemcells(MSCs)hepatocyte近年來(lái)的研究表明，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesench
7、ymalstemcell，MSCs)在一定條件下能分化為肝細(xì)胞1，這為臨床上解決肝細(xì)胞移植、生物人工肝等的肝源短缺問(wèn)題提供了新的思路2，但MSCs的分化方向受周?chē)h(huán)境多種因素影響和決定，尋求適合MSCs增殖及向肝細(xì)胞定向分化的條件是目前尚需解決的重要問(wèn)題。本研究采用含正常大鼠血清、瘀膽血清及肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocytegroo公司，美國(guó));倒置熒光顯微鏡、倒置相差顯微鏡(Olympus公司，日本);酶標(biāo)儀(Bio-Rad公司，美國(guó))PCR擴(kuò)增儀(PE公司，美國(guó))。1.3MSCs的分離、純化與鑒定在無(wú)菌條件下取8～10周齡SC
8、s用于分化及鑒定。1.4MSCs的誘導(dǎo)培養(yǎng)1.4.1制備大鼠血清取健康)成分DMEM-LG、5%FBS、地塞米松10-7mmol/L、羥乙基哌嗪乙磺酸20mmol/L、葡萄糖1g/L、半乳糖2g/L、胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-亞硒酸鈉10ml
