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《紅色熒光蛋白(rfp)的原核表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、分子生物學(xué)綜合實驗紅色熒光蛋白（RFP）的原核表達報告題目紅色熒光蛋白（RFP）的原核表達作者姓名饒慧班級學(xué)號0802班/2008114010214指導(dǎo)教師王友如完成時間2011年02月生物學(xué)實驗教學(xué)中心分子生物學(xué)綜合實驗?zāi)夸浺?1實驗材料及實驗儀器41.1實驗材料41.2實驗儀器52實驗方法72.1重組質(zhì)粒的構(gòu)建72.2工程菌株的活化72.3誘導(dǎo)表達82.4SDS-PAGE檢測表達蛋白83結(jié)果與分析9總結(jié)10參考文獻11致謝13分子生物學(xué)綜合實驗紅色熒光蛋白的原核表達饒慧（指導(dǎo)老師：王友如）（湖北師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院生物科學(xué)0802班湖北黃石
2、435002）摘要實驗?zāi)康模貉芯考t色熒光蛋白（RedFluorescentProtein，RFP）基因在大腸桿菌中原核表達。實驗方法：通過分別將DH-5ɑ(pDsRed-N1)和DH-5ɑ(pET-28ɑ)提取質(zhì)粒、酶切并連接形成重組質(zhì)粒pET-28a-RFP，將重組質(zhì)粒通過轉(zhuǎn)化的方法把含紅色熒光蛋白（RFP）外源基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌體內(nèi)進行表達，再用IPTG誘導(dǎo)RFP基因表達，可以看到顯現(xiàn)紅色，最后根據(jù)SDS-PAGE電泳結(jié)果，判斷RFP基因在大腸桿菌中是否成功表達。實驗結(jié)果：結(jié)果顯示構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-28ɑ-RFP在E.coli中成功表達。關(guān)
3、鍵詞紅色熒光蛋白；質(zhì)粒重組；原核表達；誘導(dǎo)表達分子生物學(xué)綜合實驗ProkaryoteExpressionofRedFluorescentProtein(RFP)RaoHui(Class0802,CollegeofBiologyScience,HubeiNormalUniversity,Huangshi,Hubei,435002)AbstractObjective:TostudytheexpressionoftheRFPgeneintheE.coli.Methods:ExtracttheplasmidoftheDH-5ɑ(pDsRed-N1)and
4、DH-5ɑ(pET-28ɑ).ThenthetwoplasmidsarecutbyenzymeandareconnectedtoformpET-28a-RFPrecombinedplasmid.Guidingtherecombinedplasmid,whichcontainsexogenousgenesofRFP,intoE.coliforexpression,throughtransformativemethod.TheexpressionofRFPgenecanbeinducedbytheIPTGandthenwecanseered.Fina
5、lly,judgingwhethertheRFPgenehasexpressedsuccessfullyinE.coliaccordingtotheresultsofSDS-PAGEelectrophoresis.Results:TheresultssuggestthatpET-28ɑ-RFPrecombinedplasmidhassuccessfullyexpressedinE.coli.KeywordsRedFluorescentProtein;RecombinedPlasmid;ProkaryoteExpression;InducedExp
6、ression分子生物學(xué)綜合實驗紅色熒光蛋白的原核表達饒慧（指導(dǎo)老師：王友如）（湖北師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院生物科學(xué)0802班湖北黃石435002）引言基因標記技術(shù)是近年來發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)。熒光蛋白基因在標記基因方面由于具有獨特的優(yōu)點而引起了科學(xué)家的廣泛關(guān)注，現(xiàn)已被普遍應(yīng)用到分子生物學(xué)研究的各個方面。熒光蛋白是海洋生物體內(nèi)的一類發(fā)光蛋白，分為綠色熒光蛋白、藍色熒光蛋白、黃色熒光蛋白和紅色熒光蛋白[1]。熒光蛋白在某種定義下可以說是革新了生物學(xué)研究——運用熒光蛋白可以觀測到細胞的活動，可以標記表達蛋白，可以進行深入的蛋白質(zhì)組學(xué)實驗等等。特別是在
7、癌癥研究的過程中，由于熒光蛋白的出現(xiàn)使得科學(xué)家們能夠觀測到腫瘤細胞的具體活動，比如腫瘤細胞的成長、入侵、轉(zhuǎn)移和新生?！?999年，Matz等[2]從印度洋—太平洋地區(qū)的珊瑚蟲中分離出6種與綠色熒光蛋白(greenfluorescentproteins,GFP)同源的熒光蛋白,并鑒定了它們的光譜性質(zhì)。紅色熒光蛋白(RedFluorecentProtein,RFP)基因是從?？鸇iscoso-masp中分離出的一種新的熒光蛋白基因,其蛋白質(zhì)的最大吸收光譜為583nm，不需要任何預(yù)處理便可檢測到[3]。紅色熒光蛋白因其紅熒光較強的組織穿透力，已被廣泛用
8、于動物、植物和酵母等真核細胞內(nèi)基因表達的報告基因，但作為原核細胞表達的報告基因還鮮有報道[4]。自1999年紅色熒光被發(fā)現(xiàn)后,引起了科學(xué)
