琥珀酸脫氫酶 大鼠琥珀酸脫氫酶(sdh)說明書

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1、琥珀酸脫氫酶大鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)說明書大鼠琥珀酸脫氫酶（SDH）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定大鼠組織勻漿及相關(guān)液體樣本中琥珀酸脫氫酶（SDH）的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠琥珀酸脫氫酶（SDH）水平。用純化的大鼠琥珀酸脫氫酶（SDH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入琥珀酸脫氫酶（SDH），再與HRP標(biāo)記琥珀酸脫氫酶（SDH）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)

2、色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的琥珀酸脫氫酶（SDH）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠琥珀酸脫氫酶（SDH）的活性濃度。14試劑盒組成：試劑盒組成說明書封板膜密封袋酶標(biāo)包被板標(biāo)準(zhǔn)品：90μmol/L標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液酶標(biāo)試劑樣品稀釋液顯色劑A液顯色劑B液終止液20倍濃縮洗滌液48孔配置1份2片（48）1個(gè)1×480.5ml×1瓶1.5ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶20ml×1瓶96孔配置1份2片（96）1個(gè)1×960.5ml×1

3、瓶1.5ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶30ml×1瓶保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.1

4、4尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PB

5、S，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.14標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100

6、μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀

7、釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為60μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L，5.0μmol/L）。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30

8、秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.14洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避