琥珀酸脫氫酶作用及競(jìng)爭(zhēng)抑制的觀察

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1、1?琥珀酸脫氫酶作用及競(jìng)爭(zhēng)抑制的觀察2?紫外分光法測(cè)定核酸含量本實(shí)驗(yàn)分組為15組，如果為16組，相應(yīng)材料要增加。需要的試劑配制方法注意事項(xiàng)1.5%琥珀酸鈉溶液7.5g琥珀酸鈉一500ml-15小瓶沒(méi)冇琥珀酸鈉則用琥珀酸代替后用NaOH調(diào)和至PH7.01%丙二酸鈉5g內(nèi)二酸鈉一500ml-15小瓶沒(méi)有丙二酸鈉則用丙二酸代替后用NaOH調(diào)和至PH7.00.02%甲稀藍(lán)O.lg甲稀藍(lán)-*500ml-*15小瓶（棕色瓶）甲稀藍(lán)別名亞甲酰藍(lán)l/15mol/LNa2HPO423.6gNa2HPO4-2000m

2、l-15大瓶石蠟油可以不用分裝每個(gè)房間在水浴鍋前放1個(gè)核酸稱一淀量的小牛胸腺DNA融入0.1%的NaOH5-50ug/mL濃度羊的心臟切碎成小塊大約2g左右提前購(gòu)買，將皮、脂肪處理掉分割后放在冰箱里石英砂均勻的撒在上面注：每三個(gè)人一組，分為15紐。如果人數(shù)多可以適當(dāng)多分幾瓶試劑。所需儀器所需數(shù)量40ml試劑瓶4560ml試劑瓶15試管①4x1502x15共90個(gè)移液管（優(yōu)先10ml的本次用5ml移液管）15研缽15膠頭滴管共力個(gè)種類數(shù)量心臟提取液151.5%琥珀酸鈉151%丙二酸鈉150.02%甲

3、稀藍(lán)15蒸餡水15液體石蠟2紫外吸收法測(cè)定核酸含量一、實(shí)驗(yàn)H的：1.掌握紫外吸收法測(cè)定核酸含量的原理2.掌握利用紫外線分光度計(jì)測(cè)定核酸含量二、實(shí)驗(yàn)原理：DNA和RNA都冇吸收紫外線的性質(zhì)，授大吸收峰在260nm波長(zhǎng)處紫外線吸收是喋吟、II密喘堿基貝?有共軌雙健系統(tǒng)(一C=C—C=C一)，能夠強(qiáng)烈吸收250^280nm波長(zhǎng)的紫外光。等書(shū)上112頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)試劑與器材DNA樣品紫外分光光度計(jì)四、實(shí)驗(yàn)步驟1?取DNA樣品5m1,于紫外分光光度計(jì)上測(cè)定260nm與280nm處的0D值按下式按下式計(jì)算核酸濃度

4、①計(jì)算核酸濃度DNA的質(zhì)量濃度(mg/l)=0D260nm/0.020xLx稀釋倍數(shù)②計(jì)算核酸純度=0D260nm/0D280nm2.取DNA樣品5ml，沸水浴中加熱5min于紫外分光光度計(jì)上，測(cè)260nm處的0D值比較DNA前后吸光度0D的差異。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析備注：紫外光區(qū)：100400nm可見(jiàn)光區(qū)：400-700nm紅外光區(qū)：700500um比色杯：玻璃比色杯(glass,G)：僅用于可見(jiàn)光區(qū)石英比色杯(silici,S)：用于可見(jiàn)、紫外光區(qū)。比色杯清洗：不能丿IJ堿性試劑洗滌，川弱酸性試

5、劑洗滌，或者去污劑洗滌。琥珀酸脫氫酶的作用及競(jìng)爭(zhēng)性抑制的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆彰傅母?jìng)爭(zhēng)性抑制作用的原理及測(cè)控方法二實(shí)驗(yàn)原理琥珀酸脫氫酶是三竣酸循環(huán)中的一個(gè)重要的酶,測(cè)定細(xì)胞中有無(wú)這種酶可以初步鑒定三竣酸循環(huán)途徑是否存在。琥珀酸脫氫酶可使其底物脫氫，產(chǎn)生的氫可通過(guò)一系列傳遞體最后遞給氧而生成水。在缺氧的情況下,若有適當(dāng)?shù)氖軞潴w也可顯示出脫氫酶的作用。如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下之氫可將藍(lán)色的甲烯藍(lán)還原成無(wú)色的甲烯白。這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作甩琥珀酸-甲

6、烯藍(lán)琥珀酸脫氫酶延胡索酸-甲烯白無(wú)氧條件~k丙二酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與琥珀酸相似尼能與琥珀酸競(jìng)爭(zhēng)而和琥珀酸脫氫酶結(jié)合。若琥珀酸脫氫酶已與丙二酸結(jié)合,則不能再催化琥珀酸脫氫,這種現(xiàn)象稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。如相對(duì)地增加琥珀酸的濃度,則可減輕丙二酸的抑制作用。（參考上屆實(shí)驗(yàn)報(bào)告寫(xiě)公式）實(shí)驗(yàn)試劑與器材羊心臟、1.5%琥珀酸鈉溶液、1%丙二酸鈉溶液、0.02%甲烯藍(lán)溶液、l/15mol/LNa2HPO4溶液、液體石蠟。實(shí)驗(yàn)步驟L稱取新鮮羊4L'1.5g放研缽中，加入等體積的石英砂及l(fā)/15mol/LNa2HPO4溶液2m

7、l,搗碎成漿，再加入4mll/15mol/LNa2HPO4溶液，放置30分鐘f不時(shí)搖動(dòng)，于2000r/min離心取上清液備用。單位：滴試管號(hào)心臟提取液1?5%琥珀酸鈉1%丙一酸鈉蒸憎水0.02%甲稀藍(lán)155—25225525235205524555202注：充分搖勻，加l-1.5cm高的石蠟。37。（：水浴觀察顏色變化3將第一只試管用力搖動(dòng)觀察有無(wú)變化。五、注意事項(xiàng)要充分搖勻，覆蓋石蠟油后，觀察時(shí)切勿搖動(dòng)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析