杜塘水庫(kù)微囊藻的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特征研究

《杜塘水庫(kù)微囊藻的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特征研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、杜塘水庫(kù)微囊藻的分離培養(yǎng)研究【摘要】以杜塘水庫(kù)野生微囊藻為研究對(duì)象，利用毛細(xì)管法和等比稀釋平板法成功的分離出微囊藻單株，初步鑒定為挪氏微囊藻（Microcystisnovacekii），研究表明其生長(zhǎng)曲線符合典型的S型單細(xì)胞藻類生長(zhǎng)曲線，細(xì)胞平均生長(zhǎng)速率常數(shù)k為0.508，細(xì)胞平均倍增時(shí)間為47h。通過(guò)研究不同溫度條件對(duì)該藻生長(zhǎng)的影響表明溫度是影響該微囊藻生長(zhǎng)的重要因素，在2500lux，光暗比12h：12h時(shí)，隨著溫度的升高，該微囊藻的生長(zhǎng)速率逐漸增大。低溫（15℃）顯著抑制微囊藻的增長(zhǎng)，該微囊藻生長(zhǎng)的最適溫度為25～30℃?！娟P(guān)鍵詞】溫度；分離純化；微囊藻水體富營(yíng)養(yǎng)化對(duì)水資源利用造成了很大

2、危害，如自來(lái)水廠濾池的堵塞，藻類死亡產(chǎn)生惡臭，水體DO值下降，以及“水華”毒素引起動(dòng)物中毒及飲用水安全等問(wèn)題。因此，研究水體藻類生長(zhǎng)的規(guī)律及“水華”形成的原因，尋求防治對(duì)策，已引起許多學(xué)者的重視。杜塘水庫(kù)位于福建省漳州市云霄縣境內(nèi)，建成于1958年，水庫(kù)集水區(qū)面積約為24.21km2，實(shí)際庫(kù)容為1.27×107m3，水面面積約0.9km2，最大水深約30m，平均水深14m，是東山縣及鄰近的常山經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)等鄉(xiāng)鎮(zhèn)的主要飲用水源，年供水量約1.255×107m3，供水人口24.1萬(wàn)人。2007年9、10月份，杜塘水庫(kù)發(fā)生大面積水華，水庫(kù)表層水體呈現(xiàn)濃綠色，局部水面形成粘液狀粘稠物質(zhì)，直接威脅到當(dāng)?shù)鼐?/p>

3、民的生活飲用水安全，引起了省市有關(guān)部門的高度重視。杜塘水庫(kù)藻類的優(yōu)勢(shì)種為微囊藻，其種類達(dá)6－7種，本研究對(duì)其中常見(jiàn)的一種微囊藻進(jìn)行分離純化培養(yǎng)，為研究微囊藻的分離純化技術(shù)及生物學(xué)特征研究積累有用的資料。1實(shí)驗(yàn)材料與儀器1.1試劑90%丙酮PH7.550mMTris-HCl緩沖液BG11培養(yǎng)液：成分NaNO3K2HPO4·3H2OMgSO4·7H2OCaCl2·2H2OCitricAcidcombinedwithFerricAmmoniumCitrateEDTANa2CO3TraceMetalsolutionH3BO3MnCl2·H2OZnSO4·7H2ONa2MoO4·2H2OCuSO4·5H

4、2OCo(NO3)2·6H2O含量1.5g/L40mg/L75mg/L36mg/L6mg/L1mg/L20mg/L2.86mg/L1.81mg/L0.222mg/L0.079mg/L0.390mg/L0.0494mg/L1.2儀器海爾HRGZ-300A型光照培養(yǎng)箱HFSAFE-1200型生物安全柜NikonEclipseE200顯微鏡NikonDigitalsightDS-SMCameraUV-9100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）L-550臺(tái)式低速大容量離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）CRDX-280型不銹鋼電熱手提式滅菌消毒器（上海申安醫(yī)療器械廠）1.3試驗(yàn)藻種杜塘水庫(kù)分離

5、的野生微囊藻2實(shí)驗(yàn)方法2.1微囊藻的分離純化本實(shí)驗(yàn)采用毛細(xì)管法結(jié)合等比稀釋平板法對(duì)杜塘水庫(kù)中的微囊藻進(jìn)行分離純化。取25號(hào)浮游生物網(wǎng)撈取的水庫(kù)水樣，靜置，取少量上浮藻類群體樣品鏡檢，確認(rèn)大部分為微囊藻屬種類后，用吸管吸取少許上浮的藻類在200目篩絹上，用無(wú)菌水清洗過(guò)濾，除去其中混雜的單細(xì)胞藻，留下大部分的微囊藻群體，再在顯微鏡下用毛細(xì)管挑取微囊藻群體到無(wú)菌的BG11[1]原水混合液中培養(yǎng)（水庫(kù)原水經(jīng)過(guò)0.45μm濾膜抽濾，高溫滅菌處理），作為分離培養(yǎng)的原始藻種。再采用等比稀釋平板法：0.9%BG-11瓊脂培養(yǎng)基、25℃，2500lux，光暗比12h：12h培養(yǎng)：數(shù)天后，挑選表面光滑、藍(lán)綠色、直

6、徑約1.5mm的圓形單藻落，放入裝有10mL培養(yǎng)液的無(wú)菌小三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，生長(zhǎng)1~2周后鏡檢觀察。2.2微囊藻的形態(tài)特征觀察及種的鑒定分離純化的微囊藻種置于載玻片上觀察并拍照，顯微觀察和拍照采用的設(shè)備為NikonEclipseE200型光學(xué)顯微鏡，外接NikonDigitalsightDS-SMCamera，與臺(tái)式計(jì)算機(jī)相連拍照，數(shù)碼拍照和細(xì)胞直徑的測(cè)量通過(guò)其附帶的軟件NikonElementsF2.20(Build232)控制和實(shí)行。軟件的圖像測(cè)量前，用Olympus的物鏡測(cè)微尺（每小格0.01μm）較正。根據(jù)其形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行種的初步鑒定。2.3微囊藻培養(yǎng)條件及生長(zhǎng)曲線的測(cè)定　計(jì)數(shù)不同濃度梯度

7、的微囊藻培養(yǎng)液細(xì)胞個(gè)數(shù)（n）[2]，同時(shí)在665nm處測(cè)定相應(yīng)的吸光值，將二者的值做標(biāo)準(zhǔn)曲線。取分離好的微囊藻培養(yǎng)液接入250mL三角瓶，內(nèi)裝100mLBG11培養(yǎng)液，25℃，2500lux，光暗比12h：12h，每日固定時(shí)間測(cè)定OD665nm值。以天數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)繪制生長(zhǎng)曲線。細(xì)胞平均生長(zhǎng)速率常數(shù)公式：k=[3.322/(n-1)]·lg(An/A1)，k為藻細(xì)胞平均生長(zhǎng)速率常數(shù)，